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丙二醛含量檢測(cè)說(shuō)明書(shū)

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上傳時(shí)間：2015/6/5 10:44:49

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上 傳 者：勁馬免疫學(xué)第三方檢測(cè)中心

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                                           丙二醛（MDA）檢測(cè)試劑盒
         血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及組織、細(xì)胞樣本

 

過(guò)氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的丙二醛（MDA）可與硫代巴比妥酸（TBA）縮合，形成紅色產(chǎn)物，在 532nm 處

有吸收峰。

二、試劑盒組分

注：標(biāo)準(zhǔn)品濃度：1nmol/ul

三、 檢測(cè)樣本的預(yù)處理

1. 組織

新鮮組織樣本 100mg，以 1ml 預(yù)冷的試劑Ａ勻漿成 10%的勻漿液，12000g 離心 5min，取上清待檢測(cè)。

2. 細(xì)胞

 

消化細(xì)胞并離心收集，計(jì)數(shù) 106 個(gè)細(xì)胞每管，加入 1ml 預(yù)冷的的細(xì)胞裂解液（IP 裂解液客戶(hù)自備或購(gòu)買(mǎi)凱 基產(chǎn)品 KGP701），每隔 5min 劇烈震蕩 30s，冰上裂解 20min，12000g 離心 5min，去上清待檢測(cè)。

 

 

 

 


四、 操作方法

 

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

以組織樣本為例，參照組織樣本檢測(cè)方法，取 5 個(gè)離心管，按下表加入下列試劑：

混勻后，每管加1ml 雙蒸水，快速混勻，置于沸水浴中煮沸50min，快速放至冰水中冷卻，3000r/min、4℃

離心15min，取上清于532nm 讀數(shù)。

2. 樣本檢測(cè)

（1）血清以及細(xì)胞培養(yǎng)上清：

取0.25ml 樣品加入到1.5ml試劑C溶液中，混勻后，加入0.3ml試劑D，混勻后于沸水浴中煮沸40min，快速 放入冰水中冷卻，3000r/min、4℃離心15min，取上清于532nm 讀數(shù)。

（2）組織勻漿液

取0.2ml 勻漿上清液，加入0.2ml 試劑B，混勻后加入1.5ml 試劑C和1.5ml 試劑D，混勻，每管加入1ml 雙 蒸水，快速混勻。沸水浴中煮沸50min，快速放入冰水中冷卻，3000r/min、4℃離心15min，取上清于532nm 讀數(shù)。

（3）培養(yǎng)細(xì)胞樣本

取0.2ml細(xì)胞裂解液，加入1.5ml 試劑C 和1.5ml 試劑D，混勻，每管加入1ml 雙蒸水，快速混勻。沸水浴 中煮沸50min，快速放入冰水中冷卻，3000r/min、4℃離心15min，取上清于532nm 讀數(shù)

 

3. 結(jié)果判斷

（1）以標(biāo)準(zhǔn)品含量作為橫坐標(biāo)，OD值作為縱坐標(biāo)，以平滑線(xiàn)連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點(diǎn)。通過(guò)標(biāo)本的OD值可 在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出其濃度。


  （2）若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè)，計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

 注意：本圖僅供參考，應(yīng)以同次試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算標(biāo)本含量。

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