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總抗生素酶聯(lián)免疫分析（ELISA）使用說(shuō)明書(shū)

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上傳時(shí)間：2015/6/3 9:07:34

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總抗生素酶聯(lián)免疫分析（ELISA）使用說(shuō)明書(shū)
使用目的：
本試劑盒用于生鮮乳中總抗生素殘留的定量檢測(cè)。
2 實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA 方法，在微孔板包被有總抗生素偶聯(lián)抗原，加入總抗生素標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離總抗生素與微孔條上預(yù)包被的總抗生素偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗總抗生素抗體酶標(biāo)記物，用TMB 底物顯色，加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)，吸光值與樣品中總抗生素含量成反比，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中總抗生素的含量。
總抗生素Elisa試劑盒工作液準(zhǔn)備
1 總抗生素標(biāo)準(zhǔn)品溶液：0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb
2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用
3 樣本稀釋液：用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用
3 顯色劑：已備用，避免光線直照
4 反應(yīng)終止液：已備用

總抗生素Elisa試劑盒樣品處理程序（樣品在提取過(guò)程中，要嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作，提取過(guò)程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋?zhuān)駝t
會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存）
1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液
2強(qiáng)力振蕩3分鐘
3用Whatman No 1濾紙過(guò)濾
4取25μl處理后的樣品，加入25μl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2）
總抗生素Elisa試劑盒酶免分析步驟
1 實(shí)驗(yàn)須知
1.1 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（25±2℃），時(shí)間約2小時(shí)�；販刂潦�
溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注：一定保證回溫充分，否則影響檢測(cè)的精確度和準(zhǔn)確度。
1.2 使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存
1.3 請(qǐng)不要改變分析程序
1.4 請(qǐng)使用精確的微量移液器
1.5 操作一旦開(kāi)始，請(qǐng)不要中斷任何程序
1.6 ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序，請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作
1.7 為避免交叉污染，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣
1.8 加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面

2 分析步驟
2.1 預(yù)行編號(hào)，標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，推薦進(jìn)行雙孔檢測(cè)
2.2 取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
2.3 樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（20×）稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)
2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液
2.5 在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液
2.6 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液
2.7 在所有孔中加入50μl的抗總抗生素抗體酶結(jié)合物
2.8 輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。
3 37℃溫浴30min （溫浴過(guò)程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板，可以減少雙孔誤差）
3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，*后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液
體。
4 反應(yīng)
4.1 洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50μl顯色液A，再加 50μl顯
色液B；輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之徹底混勻
4.2 37℃溫浴10min
4.3 每孔中加入50μl終止液，混勻
4.4 在450nm下檢測(cè)吸光度，結(jié)果在5min內(nèi)讀取。
總抗生素Elisa試劑盒 結(jié)果計(jì)算
1定量分析
1.1所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）
的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
1.2以總抗生素濃度的對(duì)數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百
分吸光度值，可從曲線上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo)，即為總抗生素濃度的對(duì)數(shù)值，求得反對(duì)數(shù)即
為測(cè)定液中總抗生素濃度C（ppb）
1.3由于樣品經(jīng)過(guò)了預(yù)先稀釋?zhuān)虼烁鶕?jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋
倍數(shù)。
2 半定量測(cè)定
1.1目測(cè)半定量測(cè)定：首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光
度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。
1.2儀器半定量測(cè)定：首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色
深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。

特異性
物質(zhì) 交叉反應(yīng)
總抗生素 100%

總抗生素Elisa試劑盒參數(shù)
本試劑盒檢測(cè)下限為0.05ppb
B0吸光度*佳值應(yīng)大于1.0
試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8％，板間誤差小于15％。
用本說(shuō)明書(shū)提供的組織樣本提取方法回收率大于80％。

試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.1ppb~8.1ppb。

總抗生素Elisa試劑盒 分析限制
本試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。
更多詳情請(qǐng)參考：  www.jmbiosh.com   www.shjmsw.com  www.elisa668.com  www.tsz168.com網(wǎng)站查看

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