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G6PD,大鼠葡萄糖-6-磷酸脫氫酶ELISA試劑盒說明書
點(diǎn)擊次數(shù)：28發(fā)布時間：2017/12/21 16:41:05
更新日期：2019/1/17 8:42:21
所 在 地：美洲
產(chǎn)品型號：
優(yōu)質(zhì)供應(yīng)
詳細(xì)內(nèi)容
G6PD,大鼠葡萄糖-6-磷酸脫氫酶ELISA試劑盒說明書
本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）的含量。
有效期：6個月
保存條件：2-8℃
本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷
實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被大鼠葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
G6PD,大鼠葡萄糖-6-磷酸脫氫酶ELISA試劑盒說明書需要而未提供的試劑和器材
1． 37℃恒溫箱。
2． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
3． 自動洗板機(jī)。
4． 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。
5． 蒸餾水，容量瓶等
6． 干凈的試管和Eppendof管。
注意事項(xiàng)
1. 從-20℃取出的試劑盒，zui好在4℃解凍guoye。盒內(nèi)每一瓶解凍的溶液在開啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻，避免解凍時出現(xiàn)的分層，否則會出現(xiàn)濃度不均一的現(xiàn)象。
2. 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
3. 配制各種試劑時，切記混勻！
4. 用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
5. 建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。
6. 要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥。干燥會使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活！
7. 為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
樣品的準(zhǔn)備和保存
樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。
血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固2小時或4℃guoye，離心1000×g 10分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細(xì)胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
樣品稀釋的一般原則
用戶須查閱文獻(xiàn)了解標(biāo)本內(nèi)待測因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的zui佳檢測范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細(xì)記錄。
試劑的準(zhǔn)備和保存
A. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋和使用：在使用前2小時內(nèi)準(zhǔn)備。將凍干品管內(nèi)加入1ml樣品稀釋液，徹底溶解后做倍比稀釋。
8稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品在2小時內(nèi)使用。
B．生物素標(biāo)記抗體工作液：在使用前2小時內(nèi)準(zhǔn)備。
1. 根據(jù)每孔需要0.1ml計算總的用量（實(shí)際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml）。
2．按10ul生物素標(biāo)記抗體稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。
C．親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）工作液的準(zhǔn)備：在使用前1小時內(nèi)準(zhǔn)備。
1．根據(jù)每孔需要0.1ml計算總的用量（實(shí)配時應(yīng)多配制0.1-0.2ml）。
2．按10ul親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）加ABC稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。
D. TMB顯色工作液的準(zhǔn)備：在使用之前30分鐘，按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的比例配制TMB顯色工作液。
G6PD,大鼠葡萄糖-6-磷酸脫氫酶ELISA試劑盒說明書操作程序
1． 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。
2． 將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。
3． 酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng)90分鐘。
4． 反應(yīng)后用自動洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
5． 將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。
7． 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。
9． 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液，37℃避光反應(yīng)，反應(yīng)過程中，要經(jīng)常的觀察，當(dāng)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應(yīng)zui長不要超過30分鐘）。
10． 用酶標(biāo)儀在450nm測定O.D.值。
11． 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實(shí)際濃度應(yīng)該×N。
