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大鼠酪氨酸激酶B（TrkB）ELISA試劑盒原理
點(diǎn)擊次數(shù)：5發(fā)布時(shí)間：2017/12/7 16:46:10
更新日期：2019/1/15 8:44:45
所 在 地：美洲
產(chǎn)品型號(hào)：
優(yōu)質(zhì)供應(yīng)
詳細(xì)內(nèi)容
大鼠酪氨酸激酶B（TrkB）ELISA試劑盒原理
本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠酪氨酸激酶B（TrkB）的含量。
有效期：6個(gè)月
保存條件：2-8℃
本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷
實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被大鼠酪氨酸激酶B（TrkB）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠酪氨酸激酶B（TrkB）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。
大鼠酪氨酸激酶B（TrkB）ELISA試劑盒原理的抑制性測(cè)定法操作步驟有效期：6個(gè)月
保存條件：2-8℃
本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷
實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被大鼠酪氨酸激酶B（TrkB）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠酪氨酸激酶B（TrkB）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。
本法首先是將特異性抗體a包被于固相載體，經(jīng)洗滌加入含有欲測(cè)抗原之待檢樣品。經(jīng)孵育洗滌后再加一次未標(biāo)記的特異性抗體b，而這次加入的抗體b于次包被于固相載體上的特異性抗體a對(duì)被測(cè)抗原來(lái)說(shuō)都是特異性的，但不是用同種動(dòng)物免疫制備的，否則可出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。經(jīng)孵育洗滌后，再加酶標(biāo)記抗b抗體，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色進(jìn)行測(cè)定。這種方法與雙抗體夾心法不同之處是多加了一層抗體。因此，放大的倍數(shù)更高，故比雙抗體夾心法更加靈敏。同時(shí)避免標(biāo)記特異性抗體，而另一優(yōu)點(diǎn)是只要標(biāo)記一種抗抗體，即可達(dá)到多種應(yīng)用。
用于測(cè)定抗原的尚有第4種叫做抑制性測(cè)定法（見(jiàn)圖），它是先用抗原包被固相載體，然后分為二組，一組加入用參考抗體和被檢標(biāo)本混合孵育后的混合溶液，假如標(biāo)本中不含抗原，則參考抗體未被結(jié)合。因此它可以和包被于固相載體上的抗原結(jié)合。如標(biāo)本中含有抗原，則抗原先與參考抗體結(jié)合，故參考抗體不再與包被于固相載體上的抗原結(jié)合。對(duì)加入酶結(jié)合物（抗球蛋白）和底物僅顯示剩余結(jié)合的抗體量。再與另一組不加待檢標(biāo)本的參考系統(tǒng)比較，被檢標(biāo)本對(duì)底物顯色的抑制程度與標(biāo)本中所含抗原量成比例，二者之差，即為欲測(cè)抗原的量。
被檢標(biāo)本對(duì)底物顯色的抑制程度與標(biāo)本中所含抗原的量成比例，二者之差即為欲測(cè)抗原的量。
ELISA常用的幾種方法
一、雙抗體夾心法測(cè)定抗原
將抗原免疫種動(dòng)物獲得的抗體吸附于固相表面;
加抗原，形成抗原-抗體復(fù)合物;
加抗原免疫第二種動(dòng)物獲得的抗體，形成抗體抗原抗體復(fù)合物;
加酶標(biāo)抗抗體(第二種動(dòng)物抗體的抗體);
加底物。底物的降解量＝抗原量。
二、直接法測(cè)定抗原
將抗原吸附在載體表面；
加酶標(biāo)抗體，形成抗原—抗體復(fù)合物；
加底物。底物的降解量＝抗原量。
三、間接法測(cè)定抗體
將抗原吸附于固相載體表面；
加抗體, 形成抗原-抗體復(fù)合物；
加酶標(biāo)抗體；
加底物。 測(cè)定底物的降解量＝抗體量。
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