產(chǎn)品展示
優(yōu)質(zhì)供應
詳細內(nèi)容
我們可以根據(jù)您的應用需要,比如在檢測范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測試劑盒,有效控制檢測試劑成本。并可提供免費代測。
二、如何降低試劑盒背景的步驟
大家都知道Elisa背景太高,會導致試劑盒檢測失敗,那么背景過高,而您懷疑洗滌不夠時,根據(jù)我司多年經(jīng)驗?梢試L試增加洗滌次數(shù)。這種封鎖液便宜、不亂,在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用。假如濃渡過高,或者未準確稀釋,則會導致高背景。常用的蛋白封鎖液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。封鎖液的作用是讓不相關的蛋白占據(jù)微孔板中潛伏的結合位點。ELISA實驗的原理好像很簡樸,不過乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封鎖。假如您的背景過高,懷疑封鎖不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封鎖液,或適當延長封鎖時間。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截很多不同類型的分子相互作用。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封鎖液,后者可協(xié)助洗滌過程中的封鎖。解決這個題目的一種方法是使用雞或魚的正常血清。好的封鎖液應降低非特異性結合,但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。在實驗結束時,我們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于結果的信噪比。
假如您的ELISA不幸地碰到了高背景,那么也無需太擔心,依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分,并排除可能存在的題目。記住,非特異的抗體結合會增加背景。不外,它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。為了防止這一點,切勿使用過多的一抗或二抗。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%),它會降低特異結合,產(chǎn)生假陰性。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結合的機會。目前主要有兩種類型的封鎖液:蛋白和非離子型去污劑。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。假如您一直被背景題目所困擾,那么也許您該花些時間來優(yōu)化封鎖液。
三、“人抗中性粒細胞抗體(ANA)ELISA試劑盒”技術流程
雙抗體夾心法(檢測未知抗原)
1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3、加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
間接法(檢測未知抗體)
1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。
2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
3、加酶標抗體:于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.05ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,*后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5、終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
四、購買“人抗中性粒細胞抗體(ANA)ELISA試劑盒”客戶須知
1、液體類標本(細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿、血清、血漿、尿液、胸水、腹水、腦脊液等);
2、樣本保存:請盡早檢測,2-8℃保存一天;需更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存。如需周期收集樣本,請將樣本及時分裝標號后,置-20℃或-70℃保存;
3、請?zhí)崆案嬖V我們:您樣本的種屬、樣本數(shù)量、待測指標及其他特殊要求。
五、Elisa試劑盒報告內(nèi)容及標準
1、ELISA標準曲線;
2、詳細的實驗步驟;
3、完整的實驗報告(試劑耗材,實驗方法,實驗結果及結果說明);
4、實驗進行階段,我公司客服人員會及時向您匯報實驗進程。
六、“人抗中性粒細胞抗體(ANA)ELISA試劑盒”具備價廉質(zhì)保特色優(yōu)點
1.靈活運用:我司試劑在目前市場上包含種屬、種類上千種。
2.降低成本:我公司實驗室采進口原料包備,價格實惠,能為您節(jié)省開支。
3.R&D 認可:通過美國R&D公司認可,榮獲代理權,質(zhì)量放心且保證。
4.另提供無成分試劑-試劑不含配方,不造成環(huán)境重金屬污染。
5.包裝精良:透明玻璃管附鐵氟龍旋蓋,直徑16mm,外盒為生物可分解材質(zhì),具環(huán)保概念。