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如何平衡色譜柱?
平衡過程中,將流速緩慢地提高
用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(緩沖鹽或離子對試劑度如果較低,則需要較長的時間來平衡)
色譜柱的再生 進行色譜柱再生時,應使用一個謙價的泵,我們建議不使用您的高效液相色譜儀上的泵。
表1 建議用來沖洗的溶劑體積
色譜柱尺寸 柱體積 所用溶劑的體積
125-4 1.6ml 30ml
250-4 3.2ml 60ml
250-10 -20ml 400ml
請根據(jù)下表選擇您的再生方法:
極性固定相(如Si,NH2*,DIOL基色譜填料)的再生:
正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
非極性固定相(如反相色譜填料RP-18,RP-8,CN等)的再生:
水→乙腈→氯仿(或異丙醇)→乙腈→水
0.05M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱
注意:
在對NH2改性的色譜柱進行再生時,由于NH2可能成銨根離子的形式存在,因此應該在水洗后用0.1M的氨水沖洗,然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。
**如果簡單的有機溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì),用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。
原創(chuàng)作者:長沙科美分析儀器有限公司