酶聯(lián)免疫試劑盒是比較快捷方便的藥物殘留檢測(cè)方法，但對(duì)實(shí)驗(yàn)操作條件的要求比較嚴(yán)格，實(shí)驗(yàn)條件主要有兩方面組成：

1、 實(shí)驗(yàn)室的操作環(huán)境（但ELISA試劑盒對(duì)實(shí)驗(yàn)室操作環(huán)境的要求是幾種藥物殘留檢測(cè)方法中相結(jié)較低的）

2、 操作人員的操作熟練程度：由于大部分的試驗(yàn)操作步驟都是由實(shí)驗(yàn)人員來(lái)完成的，人為的誤差相對(duì)嚴(yán)重一些。

下面所介紹的內(nèi)容是進(jìn)行Elisa操作時(shí)應(yīng)該注意的問(wèn)題。

酶聯(lián)免疫試劑盒操作的通用規(guī)則：

1、 要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性，可以使用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定（由于蒸餾水不含雜質(zhì)，溫度環(huán)境為20℃左右時(shí)，1ml的水可以看作是1g，200ul的水可以看作是0.2g），每一把微量加樣器都應(yīng)該將其量程和量程進(jìn)行確定。

2、 在使用微量加樣器時(shí)，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

3、 吸取液體時(shí)速度不且太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不夠準(zhǔn)確。

4、 將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭的液體和孔壁接觸，液體會(huì)自然流下去。吸入液體時(shí)的方法是吸兩檔打一檔，防止由于槍頭的毛細(xì)作使得部分液體不能流出而造成誤差。

5、 吸取液體時(shí)要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。

6、 液體全部加入酶標(biāo)孔后，將酶標(biāo)板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應(yīng)。

7、 孵育時(shí)要使蓋板膜封好酶標(biāo)板，防止水分蒸發(fā)，以防曲線不成線形。

8、 實(shí)驗(yàn)前半個(gè)小時(shí)將試劑從冰箱中取出，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同。（酶標(biāo)板只要取出需要量）

9、 由于底物顯色劑對(duì)光及其敏感，因此要避光保存。

10、 手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后，應(yīng)靜置15-30s，不要將一個(gè)酶標(biāo)孔中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。

11、 檢測(cè)吸光值前應(yīng)將酶標(biāo)儀打開，將其預(yù)熱30min以上。

12、 底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2mol的濃硫酸，具有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸皮膚。

13、 孵育時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書上的時(shí)間為準(zhǔn)。

14、 要盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。

15、 沒(méi)有去離子水或雙蒸水時(shí)，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來(lái)水。

16、 不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同，所以務(wù)必按照所用試劑盒嚴(yán)格操作，否則容易產(chǎn)生檢測(cè)結(jié)果的不確定性。且同一廠家不同批次的產(chǎn)品也不能交叉使用。