玉米赤霉烯酮ELISA檢測(cè)試劑盒
適用
Beacon玉米赤霉烯酮檢測(cè)試劑盒利用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附原理定量檢測(cè)玉米，玉米粉，玉米胚芽粉，玉米麩質(zhì)粉中的玉米赤霉烯酮。

檢測(cè)原理
Beacon玉米赤霉烯酮檢測(cè)試劑盒是基于競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法。用甲醇/水震蕩萃取粉碎樣品中的玉米赤霉烯酮,過濾水相萃取物，然后進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)。加玉米赤霉烯酮的酶標(biāo)記物到已加有標(biāo)準(zhǔn)或樣品的測(cè)試孔中，抗體被加入后反應(yīng)開始，樣品及酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合連接在微孔上的抗體，10分鐘培養(yǎng)后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未的結(jié)合玉米赤霉烯酮和酶標(biāo)記物。加入無色的底物溶液，培養(yǎng)5分鐘，所有結(jié)合的酶標(biāo)記物使底物轉(zhuǎn)化成藍(lán)色物質(zhì)。加入停止液然后讀取吸光度值，未知濃度樣品與標(biāo)準(zhǔn)吸光度值進(jìn)行比較，就可以得到樣品的玉米赤霉烯酮濃度。

特異性
Beacon玉米赤霉烯酮檢測(cè)試劑盒對(duì)于玉米赤霉烯酮及其結(jié)構(gòu)類似物具有的特異性，，以下表格顯示了交叉反應(yīng)率。
CompoundCross-Reactivity
a-zearalenol160%
b-zearalenol16%
a-zearalanol42%
b-zearalanol14%
zearala40%

試劑及材料
若試劑盒保存在2-8℃，未拆開包裝的試劑盒在標(biāo)識(shí)的保質(zhì)期之前均可放心使用。
1．真空包裝，包含干燥劑的8×12的微孔板。
2．5瓶2ml濃度為0，0.02，0.05,0.25,1.0 ug/ml（ppm）的玉米赤霉烯酮標(biāo)準(zhǔn)品，（注意：因?yàn)楣任飿悠吩谳腿∵^程中1：5稀釋，標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)際上為設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)濃度的1/5，所以原始樣品的濃度無需換算。）
3．1瓶8ml的酶標(biāo)記物。
4．1瓶8ml的兔抗玉米赤霉烯酮抗體。
5．1瓶14ml的底物溶液
6．1瓶14ml的停止液（注意：1N 鹽酸，小心操作�。�
7．操作說明書

注意事項(xiàng)
1．Beacon Don試劑盒中的試劑須合理使用。其他生產(chǎn)商的試劑不可替代本試劑盒中的任何試劑，不同批次之間的試劑不可混用。
2．操作程序中未提到的樣品或者試劑中雜質(zhì)或被稀釋，將會(huì)導(dǎo)致結(jié)果失真。
3．不可使用過期試劑。
4．開始實(shí)驗(yàn)前試劑須置于室溫（20-28℃）,避免試劑在室溫存放過久（＞24小時(shí)）。
5．玉米赤霉烯酮為極毒物質(zhì)，將所有丟棄的液體倒入盛有家用漂白粉(不低于10%)的塑料容器中，所有的實(shí)驗(yàn)器具必須在30%家用漂白粉溶液中浸泡至少1小時(shí)，戴上手套穿上防護(hù)服以避免皮膚及黏膜與試劑或樣品萃取物接觸，如果一旦接觸，必須立即用大量水沖洗。
6．停止液為1N 鹽酸，避免皮膚及黏膜接觸，如果有噴灑，立即清除并用大量水沖洗。

所需材料（不提供）
1．實(shí)驗(yàn)室用蒸餾水或去離子水
2．ACS級(jí)甲醇
3．量筒，100ml或者更大
4．用于萃取樣品及收集萃取液玻璃器皿
5．濾紙，Whatman GF/A及相當(dāng)者
6．可吸取50ul容量的移液器及一次性吸頭
7．可吸取50ul或100ul的八道移液器及一次性吸頭
8．吸水紙
9．450nm的酶標(biāo)儀
10．計(jì)時(shí)器

萃取液的準(zhǔn)備
1．量取30ml的蒸餾水或去離子水并轉(zhuǎn)移到帶有蓋子的干凈玻璃容器內(nèi)。
2．量取70ml的甲醇并加入轉(zhuǎn)移到上述容器內(nèi)
3．蓋進(jìn)蓋子，充分混合后，以備使用，但要防止揮發(fā)。

樣品的準(zhǔn)備
1．粉碎好的樣品能過20目篩并在取樣前徹底混合，如果樣品不能立即分析，應(yīng)該冷凍儲(chǔ)存。
2．稱取20g粉碎樣品，再量取100ml70%的甲醇/水溶液與樣品混合至一有蓋容器中。
3．蓋好蓋劇烈震蕩3分鐘。
4．靜置2-3分鐘，使樣品沉淀。
5．用Whatman GF/A玻璃纖維濾紙過濾15ml萃取液，收集濾液到一干凈容器中。

檢測(cè)程序（注意對(duì)標(biāo)準(zhǔn)及樣品做平行測(cè)試，可以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度及精確度）
1．開始實(shí)驗(yàn)前要求試劑及樣品萃取液達(dá)到室溫。
2．取適量的孔條固定在微孔板架上，確定未使用的孔條，與干燥劑一同放入密封袋中保存。
3．加入50ul的酶標(biāo)記物到微孔中。
4．加入50ul的樣品及標(biāo)準(zhǔn)品到相應(yīng)的孔中，注意使用一次性吸頭防止交叉污染
5．加入50ul抗體溶液到微孔中，輕微震蕩微孔板。
6．室溫下孵育10分鐘。
7．倒掉微孔中溶液，微孔中注滿蒸餾水，然后到掉，重復(fù)4次，共五次洗板。
8．*后一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻轉(zhuǎn)微孔板在吸水紙上拍干。
9．每孔中加入100ul的底物溶液。
10．室溫下孵育5分鐘。
11．每孔中加入100ul停止液。
12．450nm讀吸光度值。

結(jié)果判斷
1．半定量結(jié)果的判定，可根據(jù)樣品的吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值來判定，樣品的吸光度值低于某個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值，則說明樣品的玉米赤霉烯酮含量大于此標(biāo)準(zhǔn)的濃度，樣品的吸光度值高于某個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值，則說明樣品的玉米赤霉烯酮含量小于此標(biāo)準(zhǔn)的濃度。
2．定量結(jié)果判定，需要以標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)濃度的半對(duì)數(shù)為Y軸繪制曲線圖，將標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)用用直線連接，并且樣品吸光度值也位于這條直線上，根據(jù)直線上樣品的吸光度值在Y軸上即可找到相應(yīng)樣品的濃度，如果樣品的吸光度值大于標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值或小于*小樣品的吸光度值，即可說明此樣品玉米赤霉烯酮中的含量大于1ppm或小于0.02ppm。