一、液相色譜儀概況及液相色譜工作原理

色譜法的分離原理是：溶于流動(dòng)相（mobile phase）中的各組分經(jīng)過固定相時(shí)，由于與固定相（stationary phase）發(fā)生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。

色譜法*早是由俄國植物學(xué)家茨維特（Tswett）在1906年研究用碳酸鈣分離植物色素時(shí)發(fā)現(xiàn)的，色譜法（Chromatography）因之得名。后來在此基礎(chǔ)上發(fā)展出紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法。

液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動(dòng)相，稱為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時(shí)間長（常有幾個(gè)小時(shí)）。高效液相色譜法（High performance Liquid Chromatography，HPLC）是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會(huì)引起高阻力，需用高壓輸送流動(dòng)相，故又稱高壓液相色譜法（High Pressure Liquid Chromatography，HPLC）。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法（High Speed Liquid Chromatography，HSLP）。也稱現(xiàn)代液相色譜。

二、液相色譜儀HPLC的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)

HPLC有以下特點(diǎn)：

高壓——壓力可達(dá)150~300 Kg/cm2。色譜柱每米降壓為75 Kg/cm2以上。

高速——流速為0.1~10.0 ml/min。

高效——可達(dá)5000塔板每米。在一根柱中同時(shí)分離成份可達(dá)100種。

高靈敏度——紫外檢測器靈敏度可達(dá)0.01ng。同時(shí)消耗樣品少。

HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點(diǎn)：

速度快——通常分析一個(gè)樣品在15~30 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。

分辨率高——可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到*佳分離效果。

靈敏度高——紫外檢測器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測器可達(dá)0.1pg。

柱子可反復(fù)使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。

樣品量少，容易回收——樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。

對(duì)于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、相對(duì)分子質(zhì)量大的有機(jī)物原則上都可用HPLC進(jìn)行分離、分析。