2．快速純憶質(zhì)粒DNA(脫氧核糖核酸)

離心色層吸附柱(Horaprep p-DNA)設(shè)備是用來純化和恢復(fù)在細菌染色體中的雙鏈質(zhì)粒DNA的。這個離心柱的方法令人注目地代替了使用溴乙錠一氯化銫的密度梯度的純化法，并且宣告了不再需要超速離心而可實現(xiàn)全部離心操作過程：收集細菌、制備澄清的溶菌液、制備粗的質(zhì)粒DNA和*終純化質(zhì)粒。

用離心色層柱Heraprep p-DNA制備的質(zhì)粒ONA有著可與溴乙錠一氯化銫密度梯度純化的質(zhì)粒相媲美的純度。廣泛地檢測了用離心色層柱Heraprep p-DNA純化的質(zhì)粒DNA，證明其純度適用于限制性內(nèi)切酶分析、連接、轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞和轉(zhuǎn)化細菌。此外，大小由2．7kb到至少23kb的質(zhì)粒DNA都可以用Heraprep

p DNA柱來純化。

Heraprep P—DNA離心色層柱還包括1個處理管和1個收集管。一旦制備好粗的質(zhì)粒DNA，并且將它懸浮于1．8ml的10ml TrisHCL，pH值為8．0，lmM EDTA，IM NaCI溶液中時，樣品就可以在Heraprep P—DNA柱中離心了。

在啟用這根柱時，除去其頂部與底部的封口，排去過量的平衡緩沖液。然后將柱放在1根收集管中．裝入16ml的套簡，在HSA7．290不平轉(zhuǎn)頭中， 1 100×g離心lmin，這根柱就作好使用準備了

收集到的流出液和收集管一起丟掉。樹脂在上部的柱支撐物之下壓縮了大約lcm是正常的。

樣品的體積是1．8ml。樣品必須十分小心地加到樹脂床的支撐物上面去。

柱和收集管這一套裝置在2O℃下，以2 430r／min(1 100Xg)的速度離心25min

向含有純化質(zhì)粒的流出液中加入0．6體積的異丙醇，顛飼一下加以混合，室溫下20min。

在2O℃ 下，用HFA 固定角轉(zhuǎn)頭22．5O，以l 000r／min(1 200×g)的速度離心30min回收質(zhì)粒DNA。用冷的70 乙醇洗質(zhì)粒DNA1次，真空抽干并懸浮于適當?shù)木彌_液中。

雖然，高速轉(zhuǎn)頭的種類還可以由一些特殊型式來進一步擴充，例如連續(xù)流量式和洗滌式轉(zhuǎn)頭等，但是，現(xiàn)有的轉(zhuǎn)頭及其附件已經(jīng)能夠應(yīng)付所有的離心任務(wù)了，并且典型地屬于超速離心任務(wù) 試樣的容器和常用的以及商業(yè)上通用的容器是一樣的

原創(chuàng)作者：凱達離心機世界