產(chǎn)品名稱:兔粘液瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒

英文名稱:Rabbit Pox Virus(RPV)PCR

準(zhǔn)備物品:

清理液(A)                                     毫升

染色液(t B)                                   微升

稀釋液(C)                                     毫升

溶解液(tD)                                    毫升

產(chǎn)品說明書                                        1份

反應(yīng)五要素:

兔粘液瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3＇端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3＇端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

注意事項(xiàng):

兔粘液瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒
1.基礎(chǔ)程序。

2.擴(kuò)增溫度和延伸溫度。

3.反應(yīng)時(shí)間。

4.循環(huán)次數(shù)。

5.PCR 反應(yīng)液的配制。

6.PCR技術(shù)的基本原理。

7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)。

8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。