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脫氮副球菌PCR檢測試劑盒
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產品數(shù)：7354
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詳細內容
產品名稱:脫氮副球菌PCR檢測試劑盒
英文名稱:Paracoccus denitrificansPCR
準備物品:
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產品說明書 1份
反應五要素:
脫氮副球菌PCR檢測試劑盒參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二結構,避免兩條引物間互補,特別是3＇端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3＇端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
注意事項:
脫氮副球菌PCR檢測試劑盒
1.基礎程序。
2.擴增溫度和延伸溫度。
3.反應時間。
4.循環(huán)次數(shù)。
5.PCR 反應液的配制。
6.PCR技術的基本原理。
7.PCR的反應動力學。
8.PCR擴增產物。
9.PCR反應體系與反應條件。
