產(chǎn)品特點

一、高效、靈敏、特異的抗ti;

二、穩(wěn)定的重復性和可靠性;

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體;

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型;

五、節(jié)省實驗經(jīng)費。

組成結(jié)構(gòu)

1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2、血漿:EDTA、檸檬suan鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、保存:如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

自備材料

1．蒸餾水。

2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3．振蕩器及磁力攪拌器等。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣ben稀釋ye40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

安全性

1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

4．試劑應按標簽說明書儲存，使用恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

5．實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

6．不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)使用。

7．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

8．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9．洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

10．底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有du。實驗完成后應立即讀取OD值。

11．加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

12．按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

試劑盒小貼士

1. 在收到試劑盒后，為保證檢測效果，需要根據(jù)說明書中保存條件正確儲存。除非特別注明，試劑盒大多是在2～8°C條件下儲存

2. 在實驗進行，請確認包裝中的試劑盒成分與說明書一致，再進行后續(xù)操作

3. 溶解標準品過程中，注意標準品是否受潮，過程中要避免產(chǎn)生泡沫

4. 為了避免交叉污染，配置不同濃度標準品、上樣、加不同試劑都需要換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽

5. 每次孵育時，正確使用封板膠紙可保證結(jié)果的準確性

6. 正確洗板有助于實驗結(jié)果的穩(wěn)定性

7. TMB顯色底物在上板應為無色，請避光保存。加入孔板后，將由無色變成不同程度的藍色

8. 終止液上板順序需與底物上板順序一致，加入終止液，溶液顏色由藍色變?yōu)辄S色。如果出現(xiàn)綠色，即表明終止液與底物未混勻，請充分混合