【臍帶單核細(xì)胞】下面是細(xì)胞株培養(yǎng)的具體無菌技術(shù)要點(diǎn)：

1. 實(shí)驗(yàn)開始前，無菌室和無菌操作臺(tái)需要紫外光照射30到60分鐘完全滅菌，用70%ethanol擦拭無菌操作臺(tái)面，并且打開無菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)行10分鐘之后，才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只能處理一株細(xì)胞株，即使培養(yǎng)基完全相同也不可共用培養(yǎng)基，以避免細(xì)胞間污染或失誤混淆。實(shí)驗(yàn)完成后，請(qǐng)將實(shí)驗(yàn)物品拿出工作臺(tái)，用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)該讓無菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10分鐘到15分鐘后，才能進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株的操作。

2. 無菌操作工作的區(qū)域應(yīng)保持清潔和寬敞，必要物品（試管架、吸管、吸取器或吸管盒等）可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品使用完畢后應(yīng)移出，有利于空氣流通。實(shí)驗(yàn)用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)在臺(tái)面的中央無菌區(qū)域內(nèi)完成，請(qǐng)勿在邊緣非無菌區(qū)域進(jìn)行操作。

3. 小心取用無菌實(shí)驗(yàn)物品，避免細(xì)菌污染。請(qǐng)勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處，也不要在打開的容器正上方進(jìn)行操作。容器打開后，請(qǐng)用手夾住瓶蓋并輕握瓶身，傾斜大約45°角取用，盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。

4. 工作人員應(yīng)當(dāng)首先注意自身安全，必須穿戴齊實(shí)驗(yàn)衣和實(shí)驗(yàn)手套后才能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于病毒感染或是來自人類的細(xì)胞株應(yīng)當(dāng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無菌操作臺(tái)進(jìn)行（至少是Class II）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol的產(chǎn)生，小心有毒性藥品，例如DMSO和TPA等，并避免針頭的傷害等等。

5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目：

5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力

5.2. CO2培養(yǎng)箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染（水盤的水需用無菌水，每周定時(shí)更換）。

5.3. 無菌操作臺(tái)內(nèi)的airflow壓力，定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜，預(yù)濾網(wǎng)（300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000小時(shí)/HEPA）。

6. 水槽內(nèi)可添加消毒劑（Zephrin 1:750），需定期更換水槽中的水。

【臍帶單核細(xì)胞】齊一生物友情提醒，本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！

一細(xì)胞說明，具體詳細(xì)請(qǐng)見細(xì)胞附帶說明書

 二、客戶自備試劑

1、PBS  

2、 2、RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

3、0.25%  （W/V）胰蛋白酶（含 0.02% EDTA）

三、細(xì)胞背景

1、生長方式：貼壁

2、種屬：Homo sapiens  人

四、培養(yǎng)條件

1、培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基（不含 Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗

2、溫度：37.0°C

3、氣體:空氣  95%，CO2 5%

【臍帶單核細(xì)胞】五、培養(yǎng)方法

 收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況：

 如果細(xì)胞未長滿，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞已長滿（達(dá) 80-90%）。即可進(jìn)行傳代，具六、體步驟如下：

1，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗 1-2次。

2，向瓶內(nèi)加入 1.0-2.0ml 胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，吸取胰蛋白酶，加含有 6ml  含 10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

3，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

4，傳代比例：1:2-1:3  

七、常見問題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2、細(xì)胞漂�。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

細(xì)胞培養(yǎng)代理品牌

【臍帶單核細(xì)胞】齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品的大型化學(xué)科技公司. 齊一生物銷售：021－6034 8496；181214 53965；173021 04490；Web:www.qiyibio.com

9013653  Trough, 80 ml (10)        CNY                                  

9013409  Maintenance kit, semi annual, BR9604         CNY                                  

9238811  Plate holder for bucket          CNY                                  

9019672  Rotor-Gene Q User Manual          CNY                                  

9019658  O rings - VPT Fast connector, PyroVW              CNY                                  

9019594  Belt, Z-axis gearbox (black), 8 ch., Cx8              CNY                                  

9019577  Opto switch, Z-axis, 1 ch. , Cx2          CNY                                  

9019564  Cable, 8 core, axis motor assembly, CQx            CNY                                  

9019537  Plate Stacker A/B RD, RCS          CNY                                  

9019524  Vacuum trap, CX1         CNY                                  

9019506  PLATE SEPARATOR 96 WELL HIGH         CNY                                  

216713    FastLane Cell Multiplex NR Kit (200)           CNY                                  

204252    QuantiFast Probe PCR Kit (80)            CNY                                  

9019404  Board, distribution, no PTCs, RG3              CNY                                  

9019389  LED, blue (470), RG3           CNY                                  

9019371  Hinge assembly, front hinge plate, RG6        CNY                            【臍帶單核細(xì)胞】      

9019358  Transformer, low volts, RG6        CNY                                  

1027294  AllStars Neg. siRNA AF 555 (20 nmol)        CNY                                  

9019343  LED, HRM, RG6           CNY                                  

9019326  Belt, toothed, src, detector optics, RG6              CNY                                  

9234807  Trough Lid Digene        CNY                                  

9234677  Board, shaker, non-CE          CNY                                  

9234466  Clamp, rubber, adapter plate, HS shaker,             CNY                                  

9233455  Ring, straining, pressure sensor           CNY                                  

9233443  Valve, dry way, auto vac, BR8000        CNY                                  

9019233  Valve - Dispense, PyroQ24           CNY                                  

9019218  Lead screw - Z robot, PyroQ96MD             CNY                                  

9019213  PCB 6 - Connection, PyroQ96MD        CNY                                  

9019187  Camera MX9, PyroQ96MD          CNY                                  

1020953  Buffer AVE +  Azid 108 x (2/2),KG            CNY                                  

1061096  HSV Quantification Standards              CNY                                  

1061119  HBV Controls & Quantification Standards           CNY                            【臍帶單核細(xì)胞】      

9016743  Software Pack. LiquiChip Policy Manager           CNY                                  

QC088    GenPrep gDNA Plant Kit       植物樣本                                  

QC089    彩虹 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（窄譜，2-73kDa）   20次/100微升                                 

QC090    彩虹 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（窄譜，2-73kD）    50次/250微升                                 

QC091    彩虹 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（窄譜，2-73kDa）    100次/500微升                                

QC092    彩虹 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（中譜，2-105kDa）  20次/100微升                                  【臍帶單核細(xì)胞】

QC093    彩虹 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（中譜，2-105kDa）  50次/250微升                                 

QC094    彩虹 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（中譜，2-105kDa）        100次/500微升                                

QC095    彩虹 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（寬譜，2-220kDa）  20次/100微升                                 

QC096    彩虹 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（寬譜，2-220kDa）  50次/250微升                                 

QC097    彩虹 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（寬譜，2-220kDa）  100次/500微升                                

QC098    窄譜 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（藍(lán)色，2-7lkDa）     20次/100微升                                 

QC099    窄譜 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（藍(lán)色，2-7lkDa）     50次/250微升                                 

QC100    窄譜 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（藍(lán)色，2-7lkDa）     100次/500微升                                

QC101    中譜 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（藍(lán)色，2-105kDa）        20次/100微升                                 

QC102    中譜 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（藍(lán)色，2-105kDa）        50次/250微升                                 

QC103    中譜 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（藍(lán)色，2-105kDa）        100次/500微升                                

QC105    寬譜 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（藍(lán)色，2-220kDa）        20次/100微升                                 

QC106    寬譜 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（藍(lán)色，2-220kDa）        50次/250微升                                 

QC107    寬譜 預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（藍(lán)色，2-220kDa）        100次/500微升                                

QC108    普通 蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（低范圍，15-66kDa）     20次/100微升                                 

QC109    普通 蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（高范圍，15-200kDa）   20次/100微升                                  【臍帶單核細(xì)胞】

QC110    普通 蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（寬范圍，6.5-200kDa） 20次/100微升                                 

QC111     5x蛋白樣品上樣緩沖液      5 ml                                  

QC112    30%單/雙丙烯酰胺預(yù)制膠溶液（19:1）   100ml                                

QC113    30%單/雙丙烯酰胺預(yù)制膠溶液（19:1）   500ml                                

QC114    30%單/雙丙烯酰胺預(yù)制膠溶液（29:1）   100ml                                

QC115    30%單/雙丙烯酰胺預(yù)制膠溶液（29:1）    500ml                                

QC116    40%單/雙丙烯酰胺預(yù)制膠溶液（19:1）   100ml                                

QC117    40%單/雙丙烯酰胺預(yù)制膠溶液（19:1）   500ml                                

QC118    40%單/雙丙烯酰胺預(yù)制膠溶液（29:1）    100ml                                

QC119    40%單/雙丙烯酰胺預(yù)制膠溶液（29:1）   500ml