樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。
仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，
離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次
離心。
3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程
中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000
轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃
度達(dá)到 100 萬(wàn)/ml 左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左
右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的 PBS（PH7.4）。用液氮迅速冷凍保
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存?zhèn)溆�。�?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將
標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)， 其
余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能 馬
上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融. 7. 不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟：
1. 標(biāo)準(zhǔn)品：其濃度為 320pg/ml(貯液)，再準(zhǔn)備 5 個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的 EP 管，每個(gè) EP 管中加 150
μL 的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液， 如圖所示依次倍比稀釋成 320pg/ml,160pg/ml,80pg/ml,40pg/ml, 20pg/ml，10pg/ml,，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/ml)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次
實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液
Tube 0 1 2 3 4 5
pg/ml 320pg/ml 160pg/ml 80pg/ml 40pg/ml 20pg/ml 10pg/ml
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待
測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl
（樣品*終稀釋度為 5 倍） 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃
動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，
如此重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A 50μl，再加入顯色劑 B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯
色 15 分鐘. 10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。測(cè)定應(yīng)
在加終止液后 15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。 注意事項(xiàng)：          大鼠LSD1酶聯(lián)免疫分析@*新新聞動(dòng)態(tài)
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后
如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
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控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD
值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD 值） ，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，
計(jì)算時(shí)請(qǐng)*后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） 。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。          大鼠LSD1酶聯(lián)免疫分析@*新新聞動(dòng)態(tài)
6. 底物請(qǐng)避光保存。
7. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 計(jì)算：        大鼠LSD1酶聯(lián)免疫分析@*新新聞動(dòng)態(tài)
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，根據(jù)樣品的 OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋
倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的 OD 值
代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋
倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。 試劑盒性能：
1.樣品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.990 以上。
2.批內(nèi)與批見(jiàn)應(yīng)分別小于 9%和 11%
3.保存條件及有效期：
a.試劑盒保存：2-8℃。
b.有效期：6 個(gè)月