實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被大鼠Zeste同源物
增強子2（EZH2）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)
過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用
下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠Zeste同源物增強子2（EZH2）呈正相關(guān)。
用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20
分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×
g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞
會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體
積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。
推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織
細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取
上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯?br />于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
滁州仕諾達生物科技有限公司
公司主營產(chǎn)品：ELISA 試劑盒，標準品，試劑，染色液，動物血制品，也可代理8進口品牌，還有代測服務(wù) 歡迎致電咨詢 18175256626 18256960116
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注：標本溶血會影響*后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
名稱 96 孔配置 48 孔配置 備注
微孔酶標板 12 孔×8 條 12 孔×4 條 無
標準品 0.3mL*6 管 0.3mL*6 管 無
樣本稀釋液 6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物 A 6mL 3mL 無
底物 B 6mL 3mL 無
終止液 6mL 3mL 無
封板膜 2 張 2 張 無
說明書 1 份 1 份 無
自封袋 1 個 1 個 無
備注：
1. 標準品濃度依次為：8、4、2、1、0.5、0.25 ng/mL
2. 經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中
直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本
進行適當稀釋后再進行實驗。             大鼠Zeste同源物增強子2（EZH2）試劑盒（ELISA）@
注意事項
1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室
溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中
不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。   大鼠Zeste同源物增強子2（EZH2）試劑盒（ELISA）@
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
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7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。     大鼠Zeste同源物增強子2（EZH2）試劑盒（ELISA）@
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞
試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL；
3. 樣本孔中加入待測樣本 50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 100μL，
用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙
上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。
實驗結(jié)果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪
制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。
試劑盒性能
1. 檢測范圍：0.25 ng/mL – 8 ng/mL。
2. 靈敏度：檢測濃度小于 0.1 ng/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于 10% ，板間變異系數(shù)小于 15% 。
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說明
由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分
析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。
1. *終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關(guān)，請
務(wù)必準備充足的標本備份。
2. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)
試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。
3. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有
嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到*佳的檢測結(jié)果。
4. 本公司只對試劑盒本身負責(zé)，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責(zé)，請使用者使
用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。
5. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致 ELISA
實驗結(jié)果偏差。
6. 若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時
間等，所以可能存在檢測不出的情況。
7. 某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測
抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出