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毛細(xì)管電色譜在要騙你分析中的使用

點(diǎn)擊次數(shù):453 發(fā)布時(shí)間:2010/9/2 20:41:04

毛細(xì)管電色譜是近10年來綜合了現(xiàn)代*新分離技術(shù)高效液相色譜和毛細(xì)管電泳的優(yōu)勢(shì)而發(fā)展起來的高效電分離微柱液相色譜技術(shù)。CEC一般采用熔融石英毛細(xì)管,在柱內(nèi)填充或在柱壁鍵合固定相,用高壓直流電源(或加一定的壓力)代替高壓泵,即用電滲流驅(qū)動(dòng)流動(dòng)相,溶質(zhì)依據(jù)它們?cè)诹鲃?dòng)相與固定相中的分配系數(shù)的不同和自身電泳淌度的差異得到分離,既能分離中性物質(zhì)又能分析帶電組分。因此,可將它定義為“一種溶質(zhì)與固定相間的相互作用占主導(dǎo)地位的電泳過程”。CEC是HPLC和CE的有機(jī)結(jié)合,不僅具有CE水平的高柱效,同時(shí)還具有HPLC的選擇性。它克服了CE選擇性差和分離中性物質(zhì)的困難,同時(shí)大大提高了液相色譜的分離效率,開辟了高效微分離技術(shù)的新途徑。近年來,隨著CEC柱制備技術(shù)、分離機(jī)制、儀器設(shè)備的不斷研究和發(fā)展,CEC已在分析領(lǐng)域中引起廣泛關(guān)注,并在有機(jī)小分子分離、環(huán)境分析、藥物分析和生化分析等方面得到應(yīng)用。本文就CEC的基本原理、研究進(jìn)展及其在藥物分析中的應(yīng)用作一概述。
目前CEC主要用于包括多環(huán)芳烴在內(nèi)的芳香族化合物、染料、蛋白、肽、寡聚核苷酸、氨基酸、對(duì)映體等,在藥物分析中的應(yīng)用逐漸增加。對(duì)于疏水性強(qiáng)的樣品或電泳淌度相近的離子化合物、對(duì)映體,CEC體現(xiàn)出強(qiáng)大的分離能力,并在分析速度、重現(xiàn)性、檢測(cè)限、定量方面達(dá)到了應(yīng)用的要求。

  5.1手性分離CEC進(jìn)行手性藥物對(duì)映體拆分主要有3種方式:(1)非手性固定相結(jié)合手性添加劑流動(dòng)相,手性選擇作用依靠流動(dòng)相中添加的手性選擇劑產(chǎn)生。(2)手性固定相,固定相上鍵合手性選擇劑,如環(huán)糊精、蛋白等。(3)手性分子烙印固定相。進(jìn)行記憶性、專一性手性分離。Mayer等在50μm開管柱內(nèi)壁涂布鍵合了γ-CD或β-CD的二甲基聚硅氧烷,在中性條件下,較好地分離了NSAIDs(布洛芬、氟聯(lián)苯丙酸、芴丙酸、乙哚乙酸)和1-苯乙醇的對(duì)映體。用填充法分別制備3μmODS普通電色譜柱和5μm鍵合HP-β-CD的硅膠顆粒手性電色譜柱,進(jìn)行了手性固定相和非手性固定相手性分離的比較,在拆分氯噻酮時(shí),手性固定相方式顯示出分離時(shí)間短、高選擇性和高分辨率的優(yōu)勢(shì)。另外,Li等用β-CD手性固定相拆分了環(huán)己巴比妥、安息香、脫氧核糖蛋白(DNP)-蛋氨酸、DNP-乙硫氨酸和DNP-正亮氨酸的對(duì)映體。用鍵合α1-酸性糖蛋白的手性固定相電色譜柱分離了環(huán)己巴比妥、安息香、戊巴比妥、異環(huán)磷酰胺、環(huán)磷酰胺、雙異丙吡胺、美多心安、心得安、心得平和心得舒,并考察了pH、電解質(zhì)濃度、有機(jī)溶劑濃度對(duì)保留和手性選擇性的影響。在固定相上鍵合了人血清白蛋白,拆分了安息香、羥基安定。*近,分子烙印技術(shù)已開始引用于手性分離,Schweitz等在毛細(xì)管柱內(nèi)填充含有功能性單體、交聯(lián)劑、烙印分子(如R-心得安、S-美多心安)的聚合物,使其具有單一的記憶特性,可用于相應(yīng)手性藥物的快速分離,如在120s內(nèi)可使心得安、美多心安對(duì)映體達(dá)到基線分離。

  5.2復(fù)雜成分分析復(fù)雜成分分析,特別是分子結(jié)構(gòu)相近或電泳淌度接近的混合成分的分離是比較困難,也是非常重要的。近年來CEC在這方面展示了良好的應(yīng)用前景,利用梯度洗脫電色譜較好地分析了生物體液中皮質(zhì)醇類化合物,在加電壓的同時(shí)施加1.2MPa氣壓,實(shí)施加壓電色譜并梯度洗脫,生物體液中腎上腺甾酮、氫化可的松、地塞米松、氟考龍等能在較短時(shí)間內(nèi)很好地分離,當(dāng)樣品預(yù)處理后,連續(xù)進(jìn)樣200次都能獲得良好的分析結(jié)果。同樣地,利用梯度洗脫電色譜結(jié)合電噴霧離子質(zhì)譜檢測(cè),分離了苯二氮類(安定、硝基安定)、皮質(zhì)醇類(去炎松、氫化可的松、潑尼松、可的松、甲強(qiáng)龍、倍他米松、地塞米松、腎上腺甾酮、氟考龍、丙米松)和噻嗪類利尿劑(甲苯喹唑酮、氟硫噻嗪、雙氫氟噻嗪、芐氟噻嗪、甲氯噻嗪)等藥物。

  先用ODS反相電色譜柱分析了甾類化合物Fluticasonepropionate及其含有的雜質(zhì),在提高流動(dòng)相pH和有機(jī)溶劑乙腈濃度后,分析時(shí)間明顯縮短,并在相近的條件下分析了前列腺素以及合成的中間體和其它雜質(zhì),還較好地分離了頭孢氨呋肟的非對(duì)映異構(gòu)體。為了更好地分離強(qiáng)極性或帶電組分,達(dá)到快速高效,用強(qiáng)陽離子交換樹脂替代ODS填料,對(duì)三環(huán)類抗抑郁劑(丙咪嗪、阿米替林、去甲丙咪嗪、去甲替林、甲吡咯嗪、氯丙嗪、芐氟噻嗪)進(jìn)行分析,獲得8×106.m-1理論塔板數(shù),并有效地改善了峰形。采用加壓電色譜,15min內(nèi)分離了抗癲癇藥物及其代謝物(ethosuccinimid、撲癇酮、環(huán)氧卡馬西平、10,11-二羥卡馬西平、苯妥英、卡馬西平),10min內(nèi)分離了β-受體激動(dòng)劑(特布他林、酚丙喘寧、克喘素),還考察了電壓、附加壓力大小對(duì)分離效率和保留時(shí)間的影響。作者認(rèn)為,在加壓下可以降低流動(dòng)相pH,不需要過多考慮電滲流的損失。全面考察了電色譜系統(tǒng)的電壓、溫控、樣品進(jìn)樣量、有機(jī)溶劑等因素對(duì)藥物分析的影響,較好地分離了tipredane的非對(duì)映異構(gòu)體,并有很好的重現(xiàn)性,可以達(dá)到定量分析的要求。

  *近,采用梯度電色譜柱結(jié)合電噴霧離子質(zhì)譜檢測(cè),分析了異羥洋地黃毒苷元、羥基洋地黃毒苷元、華蟾蜍它靈、洋地黃毒苷元、華蟾蜍精、蟾蜍靈等甾類化合物。魏偉等[27]用離子交換電色譜分離鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿、鹽酸小檗堿等生物堿類成分,嘗試用CEC分離中藥復(fù)雜成分人參皂苷,開始了CEC在中藥復(fù)雜成分分析中的應(yīng)用研究。

轉(zhuǎn)載自:www.shunstar.cn

原創(chuàng)作者:杭州瑞析科技有限公司

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