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人8-異構(gòu)列腺素F2α試劑盒的包被方式

ELISA是個(gè)復(fù)雜的過程，許多重要的環(huán)節(jié)都影響到檢測的質(zhì)量：

、方法學(xué)的影響

ELISA測定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法，其中競爭抑制法（HBeAb,HBcAb等采用）因受操作時(shí)差所引起的不公平競爭等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。

二、試劑因素

不 同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量完全*，即使是通過批批檢的項(xiàng)目其檢測結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購長批號(hào)的試劑，并保證保存條 件。嚴(yán)格執(zhí)行這標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對(duì)于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng) 小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。

1、避免直接接觸終止液和底物A、B。旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。

2、實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3、不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

三、樣本因素

標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等，后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。

將 抗原或抗體固定在過程稱為包被（coating）。換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合 的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對(duì) 不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附 力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外，因此抗體的包被般均采用直接吸附法。蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。

不易吸附 在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如，在檢測抗DNA抗體時(shí)，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體般不能直接與核酸結(jié)合。 可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射（例如30W紫外燈，75cm照射12小時(shí)），以增加其吸附性能。固相載體先用堿性蛋白質(zhì)，如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預(yù)包 被，也可提高核酸的結(jié)合力。也可用親和素生物素系統(tǒng)作間接包被，即用親和素先包被載體，然后加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于 各種抗原物質(zhì)的定量測定。