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人鈣調(diào)磷酸酶試劑盒加樣

加樣應(yīng)用微量移液器（加樣槍）按規(guī)定的量加入微孔板的1/3處避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。

每次加樣應(yīng)更換吸嘴，做到人吸頭，以免發(fā)生交叉污染;干吸頭預(yù)先在血清中抽吸三次。

樣本稀釋，目的是為了減少非特異性反應(yīng)，所以定要先加稀釋液后加樣本，特別注意加樣后要在微量振蕩器上振蕩30鐘，同時(shí)注 意防止液體溢出。如后面操作步驟中加二種以上試劑時(shí)均需振蕩混勻。

如用滴瓶滴加試劑應(yīng)先將滴瓶搖勻并擠去*滴有氣泡的試劑后加樣。

溫育

抗原抗體反應(yīng)需要在定溫度下（37°C），經(jīng)過定的時(shí)間才能達(dá)到反應(yīng)的平衡點(diǎn)

ELISA邊緣效應(yīng)是由溫育形成的。所以溫育般采用能   使反應(yīng)液溫度迅速達(dá)到平衡的水浴法。種放在水浴箱的隔板上，另種是放在溫箱的濕盒里。水要浸至板條的1/3處，不可將板條疊 加放置。

邊緣效應(yīng)（2ng/mlHBsAg步法三種不同溫育法的結(jié)果）

洗滌

ELISA是靠洗滌來達(dá)到分離結(jié)合與未結(jié)合抗原抗體復(fù)合物及酶標(biāo)記物的目的，同時(shí)洗滌也可將非特異吸附的蛋白質(zhì)的干擾以及血球 、細(xì)菌中的酶干擾清除掉。

手工洗滌般采用浸泡方法：
1）甩去孔內(nèi)反應(yīng)液；

2）用洗滌液過洗遍（即注滿孔后即甩去）；

3）微孔重新注滿洗液后浸泡2-3分鐘，間歇搖動(dòng)；

4）甩去孔內(nèi)液體，拍板，用紙吸干。

重復(fù)以上操作至少5次。注意各種試劑盒的洗滌液盡量不要混用。

洗板機(jī)洗板定要預(yù)先把板架放平，使洗板機(jī)上的每個(gè)放液和吸液纖孔都能*地插入孔底，將孔內(nèi)液體全部吸干，同時(shí)要設(shè)置定的 浸泡時(shí)間。如出現(xiàn)機(jī)洗后拍板有較多殘留液時(shí)應(yīng)再用手工洗2次以上。關(guān)機(jī)要用蒸溜水沖洗管道，避免堵孔。 

顯色

HRP催化底物的步呈色反應(yīng)，同樣需要定的時(shí)間和溫度，

定要按照說明書規(guī)定的時(shí)間溫度（般為37°C，10-15分鐘）恒定反應(yīng)后終止

或根據(jù)臨界值質(zhì)控血清吸光度值達(dá)0.2左右使的時(shí)間而恒定反應(yīng)時(shí)間。