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小鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒哪家好
點擊次數(shù):0發(fā)布時間:2020/9/22 14:47:34

更新日期:2020/9/22 14:47:34
所 在 地:中國大陸
產(chǎn)品型號:
優(yōu)質(zhì)供應(yīng)
詳細(xì)內(nèi)容
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【產(chǎn)品性狀】:盒裝液體
【銷售優(yōu)勢】:量大從優(yōu)、質(zhì)量保證、如果質(zhì)量問題包退換、含稅含運費。
【運輸條件】:低溫運輸,用干冰或者冰袋低溫運輸。
【獨具特點】:① 靈敏,準(zhǔn)確和*的性能;② 用血清、血漿、組織培養(yǎng)上清或裂解產(chǎn)物進(jìn)行過驗證;③ 在半天內(nèi)可完成的現(xiàn)成、方便的檢測。
小鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒實驗過程中加樣可能碰到的問題:
1、過長(特別是室內(nèi)溫度較高時);
2、手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間;
3、加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。
相應(yīng)解決辦法:
1、標(biāo)本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2、加樣后及時放入孵箱。
3、加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。
4、如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5、標(biāo)本較多時,請分批操作。
小鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒結(jié)果判斷
定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答,分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,即用滴度來表示反應(yīng)的強度,其實質(zhì)仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中,將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗,呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低,可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強弱,這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。 在間接法和夾心法ELSIA中,陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法ELISA中則相反,陰性孔呈色深于陽性孔。兩類反應(yīng)的結(jié)果判斷方法不同,分述于下。
(1) 間接法和夾心法
這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性,顯色清晰者為陽性。但在ELSIA中,正常人血清反應(yīng)后?沙霈F(xiàn)呈色的本底,此本底的深淺因試劑的組成和實驗的條件不同而異,因此實驗中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6)。在用肉眼判斷結(jié)果時,更宜用顯色深于陰性對照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。目視法簡捷明了,但頗具主觀性。在條件許可下,應(yīng)該用比色計測定吸光值,這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本(sample,S)、陽性對照(P)、和陰性對照(N)的吸光值,然后進(jìn)行計算。計算方法有多種,大致可分為陽性判定值法和標(biāo)本與陰性對照比值法兩類。
a. 陽性判定值
陽性判定值(cut-off value)一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù),以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。用此法判斷結(jié)果要求實驗條件十分恒定,試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化,陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一定的規(guī)格,須配用精密的儀器,并嚴(yán)格按規(guī)定操作。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標(biāo)本的實驗檢測而得到的,F(xiàn)舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿,陽性對照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml。每次試驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后,先計算陰性對照A值的平均數(shù)(NCX)和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX),兩個平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個特定的數(shù)值(例0.400),試驗才有效。3個陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX,并≤1.5×NCX,如其中超出此范圍,則棄去,而已另兩個陰性對照重新計算NCX;如有兩個陰性對照A值超出以上范圍,則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算:
陽性判定值=NCX+0.05 標(biāo)本A值>陽性判定值的為陽性,小于陽性判定值的為陰性。應(yīng)注意的是,式中0.05為該試劑盒的常數(shù),只適合于該特定條件下,而不是對各種試劑均可通用。
根據(jù)以上敘述可以看出,在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質(zhì)控作用,試劑變質(zhì)和操作不當(dāng)均會產(chǎn)生"試驗無效"的后果。
b.標(biāo)本/陰性對照比值
在實驗條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的A值后,計算S/N值。也有寫作P/N的,這里的P不代表陽性(positive),而是病人(patient)的縮寫,不應(yīng)誤解。為避免混淆,更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中,有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)多為各種測定所沿用。實際上每一測定系統(tǒng)應(yīng)該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)注意的是,N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。
b. 抑制率法
抑制率表示標(biāo)本在競爭結(jié)合中標(biāo)本對陰性反應(yīng)顯色的抑制程度,按下式計算:抑制率(%)= (陰性對照A值-標(biāo)本A值)×100%/陰性對照A值.一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性,<50%為陰性。
小鼠淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒操作辦法:
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