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勁馬文獻(xiàn):大鼠(IL-4)ELISA試劑盒在文獻(xiàn)中的應(yīng)用

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上 傳 者：上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司

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Th9 細(xì)胞相關(guān)因子在肺纖維化大鼠中的作用
鮑文華 王瑾 李樹(shù)民 楊曉東 馬雪梅
佳木斯大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科( 黑龍江佳木斯 154000)

【摘要】 目的 研究 Th9 細(xì)胞相關(guān)因子 PU. 1、干擾素調(diào)節(jié)因子 4( IＲF4) 、白細(xì)胞介素 4( IL-4) 在肺纖維化大鼠中的作用。方法 將 90 只 SPF 級(jí) SD 大鼠分為健康對(duì)照組、肺纖維化組和地塞米松干預(yù)組，每組 30 只。每組分別在飼養(yǎng)第 7 d、第14 d、第28 d 各處死 10 只。氣管內(nèi)注射博來(lái)霉素制作肺纖維化模型。實(shí)時(shí)熒光 PCＲ 檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液( BALF) PU. 1、IＲF4 mＲNA 的含量，ELISA 法檢測(cè)外周血 IL-4 含量。結(jié)果 健康對(duì)照組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)肺組織結(jié)構(gòu)完整，無(wú)炎癥反應(yīng)和纖維化改變。肺纖維化組大鼠肺組織早期為肺泡炎表現(xiàn)，肺間質(zhì)和肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)大量巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);第 14 d 部分肺泡結(jié)構(gòu)消失，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)稍減少，肺泡間隔增寬，成纖維細(xì)胞增生; 第 28 d 肺泡結(jié)構(gòu)破壞，部分肺泡壁塌陷，肺泡間隔明顯增寬，細(xì)胞外基質(zhì)增生，肺組織呈廣泛纖維化改變。地塞米松干預(yù)組肺泡結(jié)構(gòu)存在，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肺泡間隔增厚、肺纖維化程度明顯輕于肺纖維化組。肺纖維化組各時(shí)間點(diǎn) BALF 中 PU. 1 mＲNA 含量明顯高于健康對(duì)照組。與肺纖維化組比較，地塞米松干預(yù)組PU. 1 mＲNA 含量第 14 d 和第 28 d 明顯減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜ 0. 05) 。肺纖維化組 PU. 1mＲNA 在第 7 d 表達(dá)增加，第 14 d 達(dá)到高峰，第 28 d 有所下降。肺纖維化組各時(shí)間點(diǎn) BALF 中 IＲF4mＲNA 含量明顯高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜ 0. 05) 。與肺纖維化組比較，地塞米松干預(yù)組第 28 d IＲF4 mＲNA 含量明顯減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＜ 0. 05) 。肺纖維化組第14 d BALF 中IＲF4 mＲNA 含量與外周血 IL-4 含量呈正相關(guān)( r = 0. 044，P ＜ 0. 05) 。結(jié)論 Th9 細(xì)胞在致大鼠肺纖維化中起作用，該作用與轉(zhuǎn)錄因子 PU. 1 和 IＲF4 有關(guān)，IL-4 可能通過(guò)激活 IＲF4 調(diào)控 Th9 細(xì)胞。

【關(guān)鍵詞】 肺纖維化; Th9; 轉(zhuǎn)錄因子; PU. 1; 干擾素調(diào)節(jié)因子 4肺纖維化是一種病因不明的彌漫性肺間質(zhì)性疾病，以肺泡炎癥、成纖維細(xì)胞增殖、細(xì)胞外基質(zhì)沉積為特點(diǎn)的疾病。研究表明，純化的 T 細(xì)胞可以刺激成纖維細(xì)胞增殖，進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)沉積［1］。Th9 細(xì)胞是一種炎癥細(xì)胞，目前認(rèn)為 Th9 細(xì)胞功能具有雙向性，既可以促進(jìn)炎癥，亦可以抑制炎癥發(fā)生。PU. 1 和干擾素調(diào)節(jié)因子 4( IＲF4) 是目前公認(rèn)的 Th9 細(xì)胞相對(duì)特異性的轉(zhuǎn)錄因子［2］，白細(xì)胞介素4( IL-4) 是 Th9 細(xì)胞的誘導(dǎo)因子。Th9 細(xì)胞作為輔助性 T 細(xì)胞的一個(gè)新亞群，已有實(shí)驗(yàn)表明細(xì)胞在支氣管哮喘和潰瘍性結(jié)腸炎等炎癥和免疫性疾病中起作用，但在肺纖維化疾病中鮮少研究。本實(shí)驗(yàn)觀察肺纖維化大鼠 PU. 1、IＲF4 的表達(dá)量，探討 IＲF4和 IL-4 的關(guān)系，旨在闡明 Th9 細(xì)胞相關(guān)因子在肺纖維化中的作用。材料與方法
一、材料
博來(lái)霉素購(gòu)自 Sigma 公司，大鼠 IL-4 ELISA 試劑盒由上海勁馬公司提供，Trizol 試劑、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBＲ Green 熒光定量 PCＲ 試劑盒由哈爾濱�；锕咎峁�。光學(xué)顯微鏡為奧林巴斯公司產(chǎn)品，酶標(biāo)儀為 Bio-Ｒad 公司產(chǎn)品，PCＲ 儀為 Bio-ＲadMin-Opticon2。


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