“上海勁馬”文獻(xiàn)：CD4 + CD25 + 調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞及 TGF-β在肺炎支原體肺炎患兒中的表達(dá)和意義
劉小群，陳蘭舉，陳嘯洪，張佩紅
摘要: 目的  初步探討CD4 +  CD25 +  調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞( Treg) 及轉(zhuǎn)化生長因子-β  ( TGF-β  ) 在肺炎支原體肺炎( MPP) 發(fā)病中的作用及可能機(jī)制。方法   采用流式細(xì)胞術(shù)( FCM) 和 ELISA 法分別檢測(cè) 2  組小兒( MPP 組及健康對(duì)照組) 外周血 CD4 + CD25 + Treg 細(xì)胞的比例及血清 TGF-β 水平，并分析二者之間的相關(guān)性。結(jié)果 ①M(fèi)PP 組患兒外周血中 CD4 +  CD25 +  Treg 細(xì)胞比例和血清 TGF-β   水平分別為［(5． 59%  ± 1． 18% ) 和(467． 74 ± 142． 05) ng / L］，
與健康對(duì)照組［(8． 20%  ± 1． 76% ) 和(730． 05 ± 197． 21) ng / L］相比，均顯著降低( P ＜ 0． 01);②MPP 組小兒血清 TGF-β   水平與 CD4 +  CD25 +  Treg 細(xì)胞比例呈正相關(guān)( r = 0． 71，P ＜ 0． 01)。結(jié)論  CD4 +  CD25 +  Treg 細(xì)胞比例及 TGF-β1 水平的降低可能參與 MPP 的發(fā)病。
關(guān)鍵詞: CD4 + CD25 + 調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞;TGF-β ;小兒;肺炎支原體;肺炎
中圖分類號(hào):  Ｒ725． 6    Ｒ563． 1    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:  A    文章編號(hào):1674-4152(2015)06-0971-03
肺炎支原體( Mycoplasma  Pneumoniae，MP) 是一種介于細(xì)菌和病毒之間的、能獨(dú)立生活的微生物，已成為小兒下呼吸道感染的主要病原體。隨著對(duì) MP 基礎(chǔ)研究的不斷深入，認(rèn)為 MP 除與呼吸道上皮細(xì)胞吸附及直接作引起肺炎支原體肺炎( Mycoplasma Pneu- moniae  Pneumonia，MPP) 外，細(xì)胞免疫反應(yīng)也參與其中［1］。CD4 + CD25 + 調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞( CD4 + CD25 + regu- latory T cells，Treg) 因具有強(qiáng)大的免疫抑制功能而成為研究的熱點(diǎn)，可能主要通過直接接觸和分泌抑制性細(xì)胞因子( 如 TGF-β) 兩大途徑發(fā)揮免疫功能。本文通過檢測(cè) MPP 患兒外周血 CD4 + CD25 + Treg 細(xì)胞比例及血清轉(zhuǎn)化生長因子-β1( TGF-β ) 水平，初步探討 CD4 + CD25 + Treg 及 TGF-β 在 MPP 發(fā)病中的作用及可能機(jī)制。
1 資料與方法
1. 1 臨床資料 選擇 2009 年 11 月—2012 年 3 月在蚌埠醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院并診斷為 MPP 的患兒30 例設(shè)為 MPP 組，平均年齡(4． 8 ± 1． 2) 歲，其中男 16例，女 14 例。診斷參照《實(shí)用兒科學(xué)》第七版關(guān)于肺炎支原體診斷要點(diǎn)［2］。選擇同期門診健康體檢兒童30 名設(shè)為健康對(duì)照組，平均年齡(4． 3 ± 1． 5) 歲，其中男 15 例，女 15 例。2  組間年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P ＞ 0． 05)。
1. 2 主要試劑 FITC 標(biāo)記小鼠抗人 CD25 單克隆抗體、PerCP 標(biāo)記小鼠抗人 CD4 單克隆抗體、溶血素，均購自美國 BD 公司;PBS 緩沖液( 自備) ，人 TGF-β1  試劑盒( 上海勁馬生物科技有限公司)。
1. 3 檢測(cè)方法
1. 3. 1 流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血 CD4 + CD25 + Treg 的比例  無菌操作靜脈取血 2  ml，EDTA 抗凝。標(biāo)本管編號(hào) A，取兩只流式專用管 A1、A2，A2 管加入 CD4-Per-
CP、CD25-FITC 各 50 μl。再在 A1、A2 管中分別加入全血100 μl，混勻，置37 ℃ 水浴箱，避光孵育15 min 后加入溶血素 2  ml，室溫避光孵育 10  min。3000  r / min離心 5  min，棄上清液。然后用 PBS  2  ml 洗滌細(xì)胞 2次，3000 r / min 離心 5 min，棄上清液。0． 5 ml 的 1% 多聚甲醛重懸細(xì)胞，待上機(jī)檢測(cè)。

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