細胞能夠從周圍環(huán)境中攝取DNA分子，并且不易被細胞內的限制性核酸內切酶分解時所處的一種特殊生理狀態(tài)稱感受態(tài)（competence）。自然環(huán)境中細菌可以吸收外源遺傳物質以增加自身對環(huán)境的適應性。人工感受態(tài)的形成， 需要低溫和鈣處理，這樣可能破壞了細胞膜上的脂質陣列 ，Ca2 +與膜上的多聚羥基丁酸化合物、多聚無機磷酸形成復合物利于外源DNA 的滲入， 外部理化因素促進了感受態(tài)的形成   。


   上海淳麥生物科技有限公司在感受態(tài)細胞的研發(fā)面，實力雄厚，擁有了克隆、表達、酵母、發(fā)根和農桿菌5大類，共計百余種感受態(tài)細胞。在電擊感受態(tài)面，擁有了大腸桿菌 電轉化感受態(tài)細胞和農桿菌電擊感受態(tài)種類，極大提高了客戶在轉基因以及文庫構建面的成功率。


 


 


 JM110感受態(tài)細胞簡要說明：


 CMbio JM110菌株具有硫酸鏈霉素抗性(StrR) ；是甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株，淳麥生物科技,山東感受態(tài)細胞廠家電話,上海淳麥生物科技有限公司，提取得到的質粒DNA，可被對dam、dcm甲基化敏感的內切酶切割； lacIqlacZΔM15的存在使JM110可以進行藍白斑篩選，但轉化效率不高，CMbio High5TM系列JM110感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19 質粒檢測轉化效率約107 cfu/μg。一般不用于質粒構建，只適用于質粒轉化。


 


 電轉感受態(tài)細胞操作說明：


 1. 0.2cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮扌發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。


 2. 取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘，待其融化，加入1-5ug質粒DNA（質粒體積不大于6ul，應該用試劑盒抽提，雙蒸水溶解），用手輕輕敲打管底混勻，立即插入冰中，用200ul槍頭將感受態(tài)-質粒混合物快速移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。


 3.啟動電轉儀，設置參數(shù)：C=25uF，PC=200ohm，V=2400V（此參數(shù)為Biorad 推薦，使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中，加入700ul 無抗生素的LB并轉移到感受態(tài)空管中，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。


 4. 6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天（當平板只含有50ug/ml kan 時，28℃培養(yǎng)48h即可；平板中同時加入50ug/ml ka疒n，20ug/ml rif 時，淳麥生物科技,山東感受態(tài)細胞廠家電話,上海淳麥生物科技有限公司，需28℃培養(yǎng)60h；如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90h）。


 


 


 


 


 

 感受態(tài)細胞操作說明：


 1、CMbio感受態(tài)細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中），加入目的DNA并用手EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。


 2、42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。


 5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。


 


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