實(shí)驗(yàn)原理：
酵母雙雜交系統(tǒng)是在酵母體內(nèi)通過重建有活性轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)來鑒定蛋白質(zhì)之間的相互作用。轉(zhuǎn)錄因子可以和DNA上特異的序列結(jié)合而啟動(dòng)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。這種DNA結(jié)合與轉(zhuǎn)錄激活的功能是由轉(zhuǎn)錄因子上兩個(gè)相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Binding Domain, BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(Activation Domain, AD)分別來完成的，并且這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域?qū)τ诨虻霓D(zhuǎn)錄激活都是必須的。在GAL4系統(tǒng)中利用轉(zhuǎn)錄因子GAL4的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域GAL4-BD與激活結(jié)構(gòu)域GAL4-AD的特異載體，分別與基因的ORFs融合，轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞。在酵母內(nèi)表達(dá)的蛋白若發(fā)生相互作用勹時(shí)，就會(huì)將GAL4-BD和GAL4-AD結(jié)合在一起，淳風(fēng)生物科技,.淳風(fēng)生物科技|||西寧酵母雙雜交文庫構(gòu)建
,西安淳風(fēng)生物科技有限公司，從而與上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)結(jié)合，激活相應(yīng)報(bào)告基因的表達(dá)，在相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基上篩選陽性。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br />酵母雙雜交文庫的構(gòu)建是篩庫的前提，可用于目的蛋白的互作蛋白大規(guī)模篩選分析蛋白質(zhì)間的相互作用，是現(xiàn)在分子生物學(xué)與生物化學(xué)常用的手段。
實(shí)驗(yàn)步驟
1.1.RNA提取
1.2.mRNA分離
1.3.cDNA合成
1.4.cDNA長度分級(jí)
1.5.分級(jí)后的cDNA與酵母雙雜交載體(pGADT7-Rec)進(jìn)行infusion重組
1.6.重組后產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
1.7.文庫鋪板檢測(cè)與菌液保存
技術(shù)指標(biāo)
 1. 插入片段＞500bp（插入片段不是越長越好，較長的片段可能會(huì)漏篩部分較小片段的互作基因），
 2. 重組率＞90%，
 3.  庫容≥1 x 108 transformants，
 4. 滴度≥2 x 107cfu/ml。
交付結(jié)果
1. 文庫構(gòu)建報(bào)告（電子版），
2. 文庫構(gòu)建圖片（電子版），
3. 轉(zhuǎn)化到酵母細(xì)胞的雙雜交文庫甘油菌。
服務(wù)周期
25個(gè)工作日
材料條件
客戶提供組織或細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)原理：
酵母雙雜交系統(tǒng)是在酵母體內(nèi)通過重建有活性轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)來鑒定蛋白質(zhì)之間的相互作用。轉(zhuǎn)錄因子可以和DNA上特異的序列結(jié)合而啟動(dòng)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。這種DNA結(jié)合與轉(zhuǎn)錄激活的功能是由轉(zhuǎn)錄因子上兩個(gè)相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Binding Domain, BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(Activation Domain, AD)分別來完成的，并且這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域?qū)τ诨虻霓D(zhuǎn)錄激活都是必須的。在GAL4系統(tǒng)中利用轉(zhuǎn)錄因子GAL4的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域GAL4-BD與激活結(jié)構(gòu)域GAL4-AD的特異載體，分別與基因的ORFs融合，轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞。在酵母內(nèi)表達(dá)的蛋白若發(fā)生相互作用時(shí)，就會(huì)將GAL4-BD和GAL4-AD結(jié)合在一起，從而與上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)結(jié)合，激活相應(yīng)報(bào)告基因的表達(dá)，在相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基上篩選陽性。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br />酵母雙雜交文庫的構(gòu)建是篩庫的前提，可用于目的蛋白的互作蛋白大規(guī)模篩選分析蛋白質(zhì)間的相互作用，是現(xiàn)在分子生物學(xué)與生物化學(xué)常用的手段。
實(shí)驗(yàn)步驟
1.1.RNA提取
1.2.mRNA分離
1.3.cDNA合成
1.4.cDNA長度分級(jí)
1.5.分級(jí)后的cDNA與酵母雙雜交載體(pGADT7-Rec)進(jìn)行infusion重組
1.6.重組后產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
1.7.文庫鋪板檢測(cè)與菌液保存
技術(shù)指標(biāo)
 1. 插入片段＞500bp（插入片段不是越長越好，較長的片段可能會(huì)漏篩部分較小片段的互作基因），
 2. 重組率＞90%，
 3.  庫容≥1 x 108 transformants，
 4. 滴度≥2 x 107cfu/ml。
交付結(jié)果
1. 文庫構(gòu)建報(bào)告（電子版），
2. 文庫構(gòu)建圖片（電子版），
3. 轉(zhuǎn)化到酵母細(xì)胞的雙雜交文庫甘油菌。
服務(wù)周期
25個(gè)工作日
材料條件
客戶提供組織或細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)原理：
酵母雙雜交系統(tǒng)是在酵母體內(nèi)通過重建有活性轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)來鑒定蛋白質(zhì)之間的相互作用。轉(zhuǎn)錄因子可以和DNA上特異的序列結(jié)合而啟動(dòng)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄。這種DNA結(jié)合與轉(zhuǎn)錄激活的功能是由轉(zhuǎn)錄因子上兩個(gè)相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域即DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Binding Domain, BD)和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(Activation Domain, AD)分別來完成的，并且這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域?qū)τ诨虻霓D(zhuǎn)錄激活都是必須的。在GAL4系統(tǒng)中利用轉(zhuǎn)錄因子GAL4的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域GAL4-BD與激活結(jié)構(gòu)域GAL4-AD的特異辶載體，分別與基因的ORFs融合，轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞。在酵母內(nèi)表達(dá)的蛋白若發(fā)生相互作用時(shí)，就會(huì)將GAL4-BD和GAL4-AD結(jié)合在一起，從而與上游激活序列(upstream activating sequence, UAS)結(jié)合，激活相應(yīng)報(bào)告基因的表達(dá)，在相應(yīng)的營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基上篩選陽性。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br />酵母雙雜交文庫的構(gòu)建是篩庫的前提，淳風(fēng)生物科技,.淳風(fēng)生物科技|||西寧酵母雙雜交文庫構(gòu)建
,西安淳風(fēng)生物科技有限公司，可用于目的蛋白的互作蛋白大規(guī)模篩選分析蛋白質(zhì)間的相互作用，是現(xiàn)在分子生物學(xué)與生物化學(xué)常用的手段。
實(shí)驗(yàn)步驟
1.1.RNA提取
1.2.mRNA分離
1.3.cDNA合成
1.4.cDNA長度分級(jí)
1.5.分級(jí)后的cDNA與酵母雙雜交載體(pGADT7-Rec)進(jìn)行infusion重組
1.6.重組后產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞
1.7.文庫鋪板檢測(cè)與菌液保存
技術(shù)指標(biāo)
 1. 插入片段＞500bp（插入片段不是越長越好，較長的片段可能會(huì)漏篩部分較小片段的互作基因），
 2. 重組率＞90%，
 3.  庫容≥1 x 108 transformants，
 4. 滴度≥2 x 107cfu/ml。
交付結(jié)果
1. 文庫構(gòu)建報(bào)告（電子版），
2. 文庫構(gòu)建圖片（電子版），
3. 轉(zhuǎn)化到酵母細(xì)胞的雙雜交文庫甘油菌。
服務(wù)周期
25個(gè)工作日
材料條件
客戶提供組織或細(xì)胞

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