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技術(shù)文章
常用培養(yǎng)基和抗生素的配制方法
點(diǎn)擊次數(shù)：960 發(fā)布時(shí)間：2011/3/24 11:04:03
細(xì)菌培養(yǎng)常用培養(yǎng)基和抗生素的配制方法
一、常用培養(yǎng)基
1、LB培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
蛋白胨10g
酵母提取物5g
氯化鈉10g
如果需要用1NNaOH(～1ml)調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。
2、SOB培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
蛋白胨20g
酵母提取物5g
氯化鈉0.5g
1mol/L氯化鉀2.5ml
用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂。
3、SOC培養(yǎng)基
成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到100ml，用0.22um的濾膜過濾除菌)。
4、TB培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
蛋白胨12g
酵母提取物24g
甘油4ml
各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60℃，再加100ml滅菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過濾除菌)。
5、2×YT培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
蛋白胨16g
酵母提取物10g
氯化鈉4ml
如果需要用1NNaOH(～1ml)調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。
6、YPD培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
蛋白胨20g
酵母提取物10g
葡萄糖20g
用水補(bǔ)足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對(duì)色氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加1.6g色氨酸，因?yàn)閅PD培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。
二、常用抗生素
氨芐青霉素(ampicillin)(100mg/ml)
溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
羧芐青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)
溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)
溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中，*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)
溶解0.1g卡那霉素于足量的水中，*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)
溶解0.25g氯霉素足量的無水乙醇中，*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
鏈霉素(streptomycin)(50mg/ml)
溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無水乙醇中，*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
萘啶酮酸(nalidixicacid)(5mg/ml)
溶解0.05g萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中，*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以15ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
四環(huán)素(tetracyyline)(10mg/ml)
溶解0.1g四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中，或者將無堿的四環(huán)素溶于無水乙醇，定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光，于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
小技巧：如配制10mg/ml卡那霉素，先在鹽水瓶或血清瓶加入10ml雙蒸水，高壓，冷卻后加入0.1g卡那霉素，混勻，濾膜過濾到試管中，再以1ml/管分裝到EP管中待用。
1、LB培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
蛋白胨10g
酵母提取物5g
氯化鈉10g
如果需要用1NNaOH(～1ml)調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。
2、SOB培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
蛋白胨20g
酵母提取物5g
氯化鈉0.5g
1mol/L氯化鉀2.5ml
用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂。
3、SOC培養(yǎng)基
成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到100ml，用0.22um的濾膜過濾除菌)。
4、TB培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
蛋白胨12g
酵母提取物24g
甘油4ml
各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60℃，再加100ml滅菌的170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液(2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過濾除菌)。
5、2×YT培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
蛋白胨16g
酵母提取物10g
氯化鈉4ml
如果需要用1NNaOH(～1ml)調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。
6、YPD培養(yǎng)基
將下列組分溶解在0.9L水中：
蛋白胨20g
酵母提取物10g
葡萄糖20g
用水補(bǔ)足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對(duì)色氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加1.6g色氨酸，因?yàn)閅PD培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。
二、常用抗生素
氨芐青霉素(ampicillin)(100mg/ml)
溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
羧芐青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)
溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中，*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以25ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)
溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中，*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以37.5ug/ml終濃度與100ug/ml氨芐青霉素一起添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)
溶解0.1g卡那霉素于足量的水中，*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)
溶解0.25g氯霉素足量的無水乙醇中，*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
鏈霉素(streptomycin)(50mg/ml)
溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無水乙醇中，*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
萘啶酮酸(nalidixicacid)(5mg/ml)
溶解0.05g萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中，*后定容至10ml。分裝成小份于-20℃貯存。常以15ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
四環(huán)素(tetracyyline)(10mg/ml)
溶解0.1g四環(huán)素鹽酸鹽于足量的水中，或者將無堿的四環(huán)素溶于無水乙醇，定容至10ml。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光，于-20℃貯存。常以10ug/ml～50ug/ml的終濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
小技巧：如配制10mg/ml卡那霉素，先在鹽水瓶或血清瓶加入10ml雙蒸水，高壓，冷卻后加入0.1g卡那霉素，混勻，濾膜過濾到試管中，再以1ml/管分裝到EP管中待用。
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