產(chǎn)品展示
磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒保存條件
點(diǎn)擊次數(shù)：32發(fā)布時(shí)間：2017/12/4 15:50:03
更新日期：2019/11/22 17:19:13
所 在 地：中國(guó)大陸
產(chǎn)品型號(hào)：
相關(guān)標(biāo)簽：磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
優(yōu)質(zhì)供應(yīng)
詳細(xì)內(nèi)容
中文名： 磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕
規(guī)格：200T
分類：細(xì)胞其他
保存溫度：—20℃
有效期：12個(gè)月
用途：用于磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細(xì)胞,適合于大多數(shù)貼壁細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。
說(shuō)明：HEK293是*適合磷酸鈣法轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,優(yōu)化條件后轉(zhuǎn)染效率可以高達(dá)85%以上,一般的轉(zhuǎn)染效率可達(dá)40～50%左右。注意無(wú)菌操作。
遠(yuǎn)慕生物是家代理生產(chǎn)與銷售科研試劑為一體的老牌商家，為客戶提供優(yōu)質(zhì)的不同系列試劑，包含有：ELISA試劑盒，液體試劑，動(dòng)物血清血漿，細(xì)胞培養(yǎng)，生物試劑，生化試劑，化學(xué)試劑，培養(yǎng)基，蛋白質(zhì)，實(shí)驗(yàn)耗材，進(jìn)口試劑，標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品，抗體，染色液，緩沖液，溶液，其他實(shí)驗(yàn)試劑等，如有需要，歡迎訂購(gòu)！
磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒操作流程：
貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1、 在轉(zhuǎn)染前24h用胰蛋白酶消化培養(yǎng)細(xì)胞，取適量對(duì)數(shù)期細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)器皿中， 待細(xì)胞密度大70～80%滿時(shí)即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染。后續(xù)操作步驟均按6孔板計(jì)算，如果轉(zhuǎn)染器皿不同，請(qǐng)按比例自行調(diào)節(jié)用量。
2、 在加入DNA之前2～4h，加入2ml不含抗生素的完全培養(yǎng)液，置于37℃ 5% CO2培 養(yǎng)箱培養(yǎng)。
3、 取DNA(體積不宜超過(guò)20μl)加入100μl Calcium chloride solution，混勻，即為 DNA-CaCl2溶液。
4、 取BBS solution 100μl，用移液器一邊吹打BBS solution，一邊逐滴加入DNA-CaCl2 溶液(操作緩慢，一般在1～2min)。
5、 室溫靜置20～30min，即為DNA-CaCl2-BBS溶液，此時(shí)可能出現(xiàn)極其微小顆粒沉淀。
6、 取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物質(zhì)均勻加入到6孔板細(xì)胞中，輕輕晃動(dòng)混勻。
7、 置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
8、 去除培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞2次，加入2ml完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，一般24h后可見(jiàn) 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的表達(dá)。
懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1、 低速離心收集懸浮細(xì)胞，用PBS洗滌1次。
2、 取DNA(體積不宜超過(guò)20μl)加Calcium chloride solution，混勻，即為DNA-CaCl2 溶液。
貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1、 在轉(zhuǎn)染前24h用胰蛋白酶消化培養(yǎng)細(xì)胞，取適量對(duì)數(shù)期細(xì)胞轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)器皿中， 待細(xì)胞密度大70～80%滿時(shí)即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染。后續(xù)操作步驟均按6孔板計(jì)算，如果轉(zhuǎn)染器皿不同，請(qǐng)按比例自行調(diào)節(jié)用量。
2、 在加入DNA之前2～4h，加入2ml不含抗生素的完全培養(yǎng)液，置于37℃ 5% CO2培 養(yǎng)箱培養(yǎng)。
3、 取DNA(體積不宜超過(guò)20μl)加入100μl Calcium chloride solution，混勻，即為 DNA-CaCl2溶液。
4、 取BBS solution 100μl，用移液器一邊吹打BBS solution，一邊逐滴加入DNA-CaCl2 溶液(操作緩慢，一般在1～2min)。
5、 室溫靜置20～30min，即為DNA-CaCl2-BBS溶液，此時(shí)可能出現(xiàn)極其微小顆粒沉淀。
6、 取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物質(zhì)均勻加入到6孔板細(xì)胞中，輕輕晃動(dòng)混勻。
7、 置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
8、 去除培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞2次，加入2ml完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，一般24h后可見(jiàn) 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的表達(dá)。
懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1、 低速離心收集懸浮細(xì)胞，用PBS洗滌1次。
2、 取DNA(體積不宜超過(guò)20μl)加Calcium chloride solution，混勻，即為DNA-CaCl2 溶液。
3、 取BBS solution，用移液器一邊吹打BBS solution，一邊逐滴加入DNA-CaCl2溶液。
4、 室溫靜置，即為DNA-CaCl2-BBS溶液，此時(shí)可能出現(xiàn)極其微小顆粒沉淀。
5、 每106個(gè)細(xì)胞沉淀用100μl DNA-CaCl2-BBS溶液重新懸浮室溫放置。
6、 6孔板每孔加入2ml不含抗生素的完全培養(yǎng)基，取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物質(zhì)均勻 加入到6孔板中，輕輕晃動(dòng)混勻。 7、 置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，去除培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞2次，加入2ml完全 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，一般24h后可見(jiàn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的表達(dá)。
磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒注意事項(xiàng)：
4、 室溫靜置，即為DNA-CaCl2-BBS溶液，此時(shí)可能出現(xiàn)極其微小顆粒沉淀。
5、 每106個(gè)細(xì)胞沉淀用100μl DNA-CaCl2-BBS溶液重新懸浮室溫放置。
6、 6孔板每孔加入2ml不含抗生素的完全培養(yǎng)基，取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物質(zhì)均勻 加入到6孔板中，輕輕晃動(dòng)混勻。 7、 置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，去除培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞2次，加入2ml完全 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，一般24h后可見(jiàn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的表達(dá)。
磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒注意事項(xiàng)：
1.轉(zhuǎn)染時(shí)，把DNA-氯化鈣溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA-氯化鈣溶液中。
2.高純度的質(zhì)粒是獲得高轉(zhuǎn)染效率的必要條件，要確保A260/A280大于1.8，并且電泳檢測(cè)抽提到的質(zhì)粒90%以上都是超螺旋。
3.在用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用濃度不高于5%的二氧化碳，二氧化碳的*佳濃度為3%左右。
4.BBS溶液的pH值直接關(guān)系到轉(zhuǎn)染效率，盡量避免把BBS溶液長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中，以免被空氣中的二氧化碳酸化。
5. 轉(zhuǎn)染時(shí)由于質(zhì)粒不同、細(xì)胞不同，*佳的質(zhì)粒用量需自行摸索。
6.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
外源基因?qū)胝婧思?xì)胞的方法有很多種，如磷酸鈣轉(zhuǎn)染法、DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染法、脂 質(zhì)體法、電穿孔法、顯微注射法等。Leagene磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒(Calcium Phosphate Cell Transfection Kit)是在傳統(tǒng)的磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改良，提高了轉(zhuǎn)染效率，并降低了毒性，可用于磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細(xì)胞，不僅可以瞬時(shí)表達(dá)，也可以篩選穩(wěn)定株。
磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
外源基因?qū)胝婧思?xì)胞的方法有很多種，如磷酸鈣轉(zhuǎn)染法、DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染法、脂 質(zhì)體法、電穿孔法、顯微注射法等。Leagene磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒(Calcium Phosphate Cell Transfection Kit)是在傳統(tǒng)的磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改良，提高了轉(zhuǎn)染效率，并降低了毒性，可用于磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細(xì)胞，不僅可以瞬時(shí)表達(dá)，也可以篩選穩(wěn)定株。
磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒相關(guān)產(chǎn)品如下：
DEAE-Dextran細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
快速過(guò)濾超大量質(zhì)粒提取試劑盒
磁珠寡核苷酸純化試劑盒
兔子S100蛋白（S-100）ELISA試劑盒
丙酮酸激酶（PK）定性檢測(cè)試劑盒（熒光斑點(diǎn)法）
淀粉酶（AMS）檢測(cè)試劑盒（碘-淀粉比色法）
大鼠α1微球蛋白（α1-MG）ELISA檢測(cè)試劑盒
磁珠法醫(yī)樣品DNA提取試劑盒
微量RNA純化試劑盒
質(zhì)粒中量提取試劑盒
膠回收/PCR純化試劑盒
DEAE-Dextran細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
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淀粉酶（AMS）檢測(cè)試劑盒（碘-淀粉比色法）
大鼠α1微球蛋白（α1-MG）ELISA檢測(cè)試劑盒
磁珠法醫(yī)樣品DNA提取試劑盒
微量RNA純化試劑盒
質(zhì)粒中量提取試劑盒
膠回收/PCR純化試劑盒
