企業(yè)檔案
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- 工商認(rèn)證： 【已認(rèn)證】
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ELISA試劑盒
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培養(yǎng)基
抗體
動(dòng)物血清血漿
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標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品
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- 中檢所標(biāo)準(zhǔn)品
- 中檢所對(duì)照品
- 中藥標(biāo)準(zhǔn)品
- 進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品
- 標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品
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實(shí)驗(yàn)耗材
聯(lián)系我們
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公司動(dòng)態(tài)
做實(shí)驗(yàn) | 用釣魚的心態(tài)，做熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)
熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH），縮寫為FISH，就是魚的意思，以此類推，做熒光原位雜交也叫釣魚。
熒光原位雜交實(shí)驗(yàn) 它的實(shí)驗(yàn)原理也挺像釣魚的：它是用已知的標(biāo)記單鏈核酸為探針，按照堿基互補(bǔ)的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行特異性結(jié)合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因而探針可以直接與染色體進(jìn)行雜交從而將特定的基因在染色體上定位。你們看，像不像在茫茫大海里面釣魚呢？探針像不像魚鉤呢？
釣魚實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)：操作煩瑣，步驟簡單。
說它操作煩瑣，是因?yàn)樗牟僮鞑襟E巨多，每一步又需要相當(dāng)長的時(shí)間，如果自己標(biāo)探針的話每批標(biāo)本大約三天時(shí)間（買試劑盒只需一天，但價(jià)格昂貴），你說是不是很煩瑣？說它步驟簡單則是因?yàn)镕ISH只要操作過程仔細(xì)，嚴(yán)格按照操作步驟操作，很容易做成功，比PCR要簡單得多。將繁瑣的簡單步驟做好也是有門道的。
探針設(shè)計(jì)，量身定制 探針就是魚鉤。魚鉤不管用，還能釣得上大魚嗎？設(shè)計(jì)探針要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要來進(jìn)行，也就是說你要檢測的目的基因決定你的探針設(shè)計(jì)。這就像是一個(gè)老練的漁夫會(huì)根據(jù)不同的魚的種類來選擇魚鉤一樣。舉個(gè)例子，如果目的基因大概是1.8KB，可以直接對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行生物素標(biāo)記。也可以找技術(shù)服務(wù)公司幫你設(shè)計(jì)合成探針，每條探針設(shè)計(jì)合成大概3500。
組織切片和載玻片的選擇
組織切片4～5μm 厚，過厚或過薄的切片均會(huì)對(duì)信號(hào)的強(qiáng)弱產(chǎn)生影響，而且切片應(yīng)完整，質(zhì)量良好，否則會(huì)在預(yù)處理時(shí)掉片。載玻片的選擇建議使用防脫載玻片，有條件的實(shí)驗(yàn)室可使用更好的陽離子或者陰離子專用載玻片，可有效防止脫片現(xiàn)象的發(fā)生。
注意標(biāo)本預(yù)處理細(xì)節(jié)
變性要規(guī)范
這一步是FISH關(guān)鍵中的關(guān)鍵。變性包括標(biāo)本變性和探針變性，這兩個(gè)步驟關(guān)系到FISH的成敗，千萬要嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行，不但如此，特殊標(biāo)本還要自己摸條件。試想變性不徹底，DNA的雙鏈都沒能完全打開，雜交能順利進(jìn)行嗎？
操作熒光抗體時(shí)要避光
操作熒光抗體的時(shí)候千萬要避光，否則將前功盡棄啊。舉個(gè)例子吧。魚竿，魚鉤，魚餌都備齊了，也不能保證一定就能釣到大魚兒。魚兒上鉤了之后，還有一個(gè)把魚拖上岸的*終過程。在FISH，就是使用熒光顯微鏡觀察和記錄結(jié)果。在正常情況下，目前商業(yè)化的探針即使是雜交以后，熒光信號(hào)能保存半年之久。有時(shí)候，信號(hào)也會(huì)急劇衰減，幾分鐘后就不見了。就像魚兒一開始上鉤了，馬上又掙脫魚鉤，重返大海了。出現(xiàn)這種情況，就是由于沒有嚴(yán)格避光。因此在觀察和記錄的時(shí)候，要盡可能地在暗室里面操作。這和以前洗照片是一個(gè)原理哈。
當(dāng)然，也有偷懶的招術(shù)。那就是：抗熒光淬滅劑（antifade），在封片觀察的時(shí)候加入，可以延緩熒光的淬滅。注意：如果一次沒有成功，可以將探針洗掉，再進(jìn)行雜交。這又像極了釣魚。次魚兒脫鉤了，我們可以換個(gè)魚鉤再釣，直到釣到大魚為止。
FISH其實(shí)做出來還是很漂亮很漂亮的。下面就是一張F(tuán)ISH的圖，讓我們一起感受一下生物學(xué)的大美。
