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流式細胞術應用 | 漂亮完成細胞因子檢測
點擊次數：448 發(fā)布時間：2018/10/8
細胞因子在淋巴細胞免疫功能調節(jié)方面發(fā)揮重要作用，它可以調節(jié)多種細胞的生長、分化和功能，調節(jié)正常與病理狀態(tài)下的免疫應答。研究生理或病理免疫調節(jié)因素導致細胞因子合成的應答與改變是探尋疾病病因與免疫狀態(tài)關系的重要工具。本實驗采用優(yōu)化的一管 8 色的多色檢測方案對人外周血 T 細胞亞群的 IFN-γ、IL-17、 顆粒酶、穿孔素表達情況進行了研究。從實驗結果圖上可看出，本實驗在 CytoFLEX 上檢測時各細胞群體分群明顯，檢測結果確切可信，能夠非常漂亮地完成此類實驗。
▶ 試劑
▶ 樣品制備
| Sample Type | 外周血單個核細胞 |
| Species | 人 |
| Age of specimen | 樣本染色后 1 h 之內完成上機檢測 |
| Prep Method | 1. 取 200 ul 全血加 200 ul1640，并加入適量 PMA 等試劑，刺激 4 h； 2. 混勻后去 100 ul 刺激后的標本并加入相應膜抗，室溫避光孵育 20 min； 3. 加固定液，孵育后離心去上清； 4. 加入適量生理鹽水，1500 rpm 轉速下離心 5 min 去除上清液； 5. 加破膜液混勻，并加入相應胞漿抗體適量，混勻后室溫避光，孵育 20 min； 6. 加入適量生理鹽水，1500 rpm 轉速下離心 5 min 去除上清液； 7. 重復 6； 8. 加入 300-500 ul 預冷的 PBS，混勻后上機檢測。 |
數據分析
使用 CD45/SSC 設門，選取淋巴細胞群（設邏輯門排除掉混雜的單核細胞），然后再取 CD3+T 淋巴細胞；分 別分析 Th 細胞與 TS 細胞的相關因子的表達情況。
實驗結果
