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MC3T3-E1 小鼠胚胎成骨細胞前體細胞操作說明

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上傳時間：2018/10/11 16:56:33

文件類型：jpg

上 傳 者：上海遠慕生物科技有限公司

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收到常溫細胞后如何處理？
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與Procell技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。



溫馨提醒：
1、可將培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基轉移至50ml無菌離心管中，備用；細胞首次傳代時，可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合使用，讓細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。
2、確認細胞狀態(tài)良好后，應及時將部分細胞凍存，再進行后續(xù)的實驗，避免后期實驗失誤可能發(fā)生細胞污染或死亡而導致的細胞丟失，影響后續(xù)實驗。
3、建議客戶收到細胞后前3天，100X、200X、400X各拍3張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于后續(xù)和Procell技術支持溝通交流。

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