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ELISA試劑盒
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ELISA試劑盒在使用中應(yīng)該注意的問題
酶聯(lián)免疫試劑盒是較普遍常用的藥物殘留檢測方法，與儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡便、確和靈敏度高等特準(zhǔn)點(diǎn)，但對實(shí)驗(yàn)操作條件的要求比較嚴(yán)格。實(shí)驗(yàn)條件主要由實(shí)驗(yàn)室的操作環(huán)境和操作人員的操作熟練程度兩方面組成，但EIA試劑盒對實(shí)驗(yàn)室操作環(huán)境的要求是幾種藥物殘留 LS檢測方法中相對較低的。由于大部分的試驗(yàn)操作步驟都是由實(shí)驗(yàn)人員來完成的，人為的誤差相對嚴(yán)重一些。本人結(jié)合幾年的工作實(shí)踐介紹一下進(jìn)行EIA操作的時(shí)候應(yīng)該注意LS的問題。
酶聯(lián)免疫試劑盒操作的通用的規(guī)則：
1.孵育的時(shí)間應(yīng)該嚴(yán)格按照試劑盒說明書上的時(shí)間為準(zhǔn)；
2.要盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性；
3.又能反映出試劑盒的精密度；
4.對樣本的結(jié)果有疑問時(shí)需要使用其他檢測方法進(jìn)行；
5.驗(yàn)證
沒有去離子水或雙蒸水時(shí)：
1.可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水；
2.使用試劑盒時(shí)出現(xiàn)問題的解決辦法；3.
檢測的結(jié)果沒有吸光度值或吸光度值很低 .可能引起的原因有試劑盒已過有效期、使用的試劑盒內(nèi) 容物不是同一個(gè)批次的、加入酶標(biāo)記物、劑盒的內(nèi)容物沒試；
4.要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性，可以使用蒸餾水和電子，天平進(jìn)行確定 (由于蒸餾水不含雜質(zhì)，溫度環(huán)境為 2%左 0右時(shí)，m l L的水可以看作是 l、0 L的水可以看作是 g20 02 )每一把微量加樣器都應(yīng)該將其zui高量程和zui低量程 .g進(jìn)行確定。
1.在使用微量加樣器時(shí)，吸取不同瓶子中液體后要更換；
2槍頭，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。 1吸取液體時(shí)速度不易太快；
3.以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不 夠準(zhǔn)確。
沒有充分的回溫、孵育的溫度太低等，對應(yīng)的解決辦法是相更換成在有效期以內(nèi)的試劑盒、使用同一個(gè)批次的試劑盒的內(nèi)容物、照試劑盒說明書中的步驟進(jìn)行操作、按將試劑盒的內(nèi)容物充分的回溫后再進(jìn)行操作、在實(shí)驗(yàn)操作的整個(gè)過程中請仔細(xì)觀察恒溫箱的溫度。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性不好，或平行性不好 ( .雙孔對照孔的 O D值差別很大)或 出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象，可能引起的原因有酶標(biāo)板孔間相互污染、洗板后未能盡快進(jìn)行下一步操作、添加樣品或其它試劑時(shí)操作的方法不對、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發(fā)、酶標(biāo)板孔問加入的試劑量不同，對應(yīng)的解決辦法是加相樣時(shí)請小心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時(shí)也請小心， 勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時(shí)進(jìn)行下一步操作、添加試劑時(shí)請懸空滴入，切記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi)，吸取不同試劑瓶中的液體時(shí)就要更換一次槍頭、確認(rèn)孵育環(huán)境不透光，蓋板膜將酶標(biāo)板密封好、使用已校正過的微量加樣器，如將*次加入液體時(shí)槍頭上留有一滴的液體滴下，那將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孑壁接觸， L液滴會自然流下去。吸入液體時(shí)的zui好的方法是吸兩檔打一檔，防止由于槍頭的毛細(xì)作用使得部分液體不能流出而造成的誤差。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
