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如何評(píng)價(jià)總RNA或mRNA的質(zhì)量??

點(diǎn)擊次數(shù)：770 發(fā)布時(shí)間：2018/11/27 9:21:30

     一個(gè)細(xì)胞有很多種的RNA，如mRNA,rRNA,tRNA總RNA指的是一個(gè)細(xì)胞（一種生物）里面所有種類的RNA平時(shí)說的提取總RNA指的就是提取一個(gè)細(xì)胞里面的所有種類的RNA 。

      mRNA的功能：把DNA模板鏈上的 堿基 序列 轉(zhuǎn)錄 為RNA分子上的堿基序列（mRNA），再?gòu)膍RNA上的堿基序列通過合成蛋白質(zhì)的機(jī)構(gòu)獲得 氨基酸 序列。


 


 

如何評(píng)價(jià)總RNA或mRNA的質(zhì)量??


 

1. 相關(guān)概念 RNA質(zhì)檢參數(shù)OD260/OD280、OD260/OD230的意義。 260、280、320、230nm下的吸光度分別代表了核酸、蛋白質(zhì)、鹽濃度和有機(jī)溶劑的值。 A230: 測(cè)定其它碳源物質(zhì)，如酚，糖類等。 A260：核酸的吸收峰測(cè)，測(cè)RNA，DNA，引物等的濃度用的。 A280：蛋白質(zhì)的吸收峰。 一般的，我們只看OD260/OD280(Ratio，R)在1.8~2.1范圍內(nèi)時(shí)，我們認(rèn)為 RNA中蛋白的污染是可以容忍的，不過要注意，當(dāng)用 Tris 作為緩沖液檢測(cè)吸光度時(shí)，R 值可能會(huì)大于 2（一般應(yīng)該是 2.2時(shí)，說明RNA已經(jīng)水解成單核酸了。純RNA的OD260/OD280的比值為2.0。

2. RNA質(zhì)量檢驗(yàn) RNA樣品的品質(zhì)檢測(cè)一般分為總量，純度與完整性三大項(xiàng)。 總量：微量分光光度計(jì)測(cè)260nm吸收值計(jì)算。 純度：微量分光光度計(jì)測(cè)260nm/230nm吸收值的比值，用于評(píng)估有機(jī)溶劑殘留；260nm/280nm吸收值的比值，用于評(píng)估蛋白質(zhì)污染比例。 完整性：以Agilent Bioanalyzer進(jìn)行毛細(xì)管電泳(capillary electrophoresis)，并以軟件的RIN(RNA Integrity Number)分?jǐn)?shù)評(píng)估，10為RNA完整性zui好，0為zui差。 l RNA純度 RNA在純化過程中容易受到DNA、蛋白質(zhì)及有機(jī)溶劑的影響，這些殘存物將會(huì)影響以后的操作。光譜分析(NANODROP)利用物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收度的不同，可以鑒別出溶液純度及濃度。RNA溶液的A260/A280的比值是一種RNA純度檢測(cè)方法，比值范圍一般為1.8-2.1。各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)對(duì)RNA純度要求不一，比如即使比值超出這個(gè)范圍，RNA樣品也一樣可以用于一些普通實(shí)驗(yàn)中，如Northern雜交、RT-PCR、熒光定量PCR和RNA酶保護(hù)等實(shí)驗(yàn)。

原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

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