企業(yè)檔案
- 會(huì)員類型：免費(fèi)會(huì)員
- 工商認(rèn)證： 【已認(rèn)證】
- 最后認(rèn)證時(shí)間：
- 法人：
- 注冊(cè)號(hào)：
- 企業(yè)類型：代理商
- 注冊(cè)資金：人民幣50萬
ELISA試劑盒
- 小鼠ELISA試劑盒
- 大鼠ELISA試劑盒
- 人ELISA試劑盒
- 兔ELISA試劑盒
- 馬ELISA試劑盒
- 豚鼠ELISA試劑盒
- 豬ELISA試劑盒
- 犬ELISA試劑盒
- 牛ELISA試劑盒
- 羊ELISA試劑盒
- 雞ELISA試劑盒
- 鴨ELISA試劑盒
- 蛇ELISA試劑盒
- 猴ELISA試劑盒
- 植物ELISA試劑盒
- 駱駝ELISA試劑盒
- 魚ELISA試劑盒
- 其他ELISA試劑盒
- 檢測(cè)試劑盒
- 其他系列提取試劑盒
- 質(zhì)粒提取試劑盒
培養(yǎng)基
抗體
動(dòng)物血清血漿
- 大鼠血清
- 小鼠血清
- 人血清
- 馬血清
- 驢血清
- 羊血清
- 胎牛血清
- 新生牛血清
- 豬血清
- 狗血清
- 雞紅細(xì)胞
- 兔紅細(xì)胞
- 綿羊紅細(xì)胞
- 巴比西鼠血清
- 其他動(dòng)物血清
- 其他動(dòng)物紅細(xì)胞
標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品
- 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
- 中檢所標(biāo)準(zhǔn)品
- 中檢所對(duì)照品
- 中藥標(biāo)準(zhǔn)品
- 進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品
- 標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品
生化試劑
緩沖液
溶液
染色液
實(shí)驗(yàn)耗材
聯(lián)系我們
聯(lián)系人：王宇豪
熱門標(biāo)簽
技術(shù)文章
小技巧:ELISA 高背景的原因分析
點(diǎn)擊次數(shù)：301 發(fā)布時(shí)間：2018/9/5 15:34:38
ELISA 實(shí)驗(yàn)過程中常常出現(xiàn)讓人難以琢磨的結(jié)果。其中陰性對(duì)照出現(xiàn)高背景的情況也時(shí)有發(fā)生，這樣導(dǎo)致結(jié)果不那么可信。出現(xiàn)高背景的原因可能如下。
1. 抗體、抗體的濃度不合適
抗體質(zhì)量不好，特異性不高可能會(huì)與封閉液（BSA）產(chǎn)生交叉反應(yīng)，可以用 0.8% 的明膠代替，本底就很好了。
抗體親和力不好，也會(huì)如此，由于加大了抗體的使用量，必然造成了非特異性增加的可能。
2. 封閉液成分、封閉液的濃度、封閉時(shí)間
封閉液，如 BSA 可能與抗體發(fā)生交叉反應(yīng)，導(dǎo)致背景偏高。
封閉液的濃度偏低，封閉時(shí)間過短，導(dǎo)致封閉不徹底，抗體與酶標(biāo)板孔結(jié)合，也可能導(dǎo)致背景偏高。
3. 孵育時(shí)間、孵育溫度
孵育時(shí)間過長 、溫度過高，也可能會(huì)導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加，從而造成本底增高。
4. 洗板液成分、洗板的時(shí)間
一般用 PBS 洗板就可以了，但有時(shí)候可以在洗板液中加入一些表面活性劑，如 tween-20。
洗板的時(shí)間不足，會(huì)導(dǎo)致抗體殘留，引起陰性對(duì)照顯色。如果是機(jī)洗，可以改為手洗少量嘗試，增加洗板時(shí)間。機(jī)洗一般沒有手洗去除干凈。
5. 顯色時(shí)間
由于系統(tǒng)優(yōu)化不好，導(dǎo)致樣品顯色較弱，而延長了顯色時(shí)間，這樣一來導(dǎo)致陰性對(duì)照也有部分顯色。此時(shí)，應(yīng)該優(yōu)化檢測(cè)系統(tǒng)，調(diào)整包被物、檢測(cè)抗體、底物等的濃度，縮短顯色時(shí)間，顯色一般不超過 15 min。
6. 樣品
樣品中含有干擾物質(zhì)。此時(shí)可以優(yōu)化系統(tǒng)，調(diào)整其他檢測(cè)抗體的比例，而增加樣品的稀釋度、增加洗脫步驟等。
7. ELISA 板的選擇
聚苯乙烯制備的 ELISA 板經(jīng)射線照射后，其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附性能增加，應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值較大。
與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。作為 ELISA 固相載體的一種，聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄，可剪割，價(jià)廉，但光潔度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。
1. 抗體、抗體的濃度不合適
抗體質(zhì)量不好，特異性不高可能會(huì)與封閉液（BSA）產(chǎn)生交叉反應(yīng)，可以用 0.8% 的明膠代替，本底就很好了。
抗體親和力不好，也會(huì)如此，由于加大了抗體的使用量，必然造成了非特異性增加的可能。
2. 封閉液成分、封閉液的濃度、封閉時(shí)間
封閉液，如 BSA 可能與抗體發(fā)生交叉反應(yīng)，導(dǎo)致背景偏高。
封閉液的濃度偏低，封閉時(shí)間過短，導(dǎo)致封閉不徹底，抗體與酶標(biāo)板孔結(jié)合，也可能導(dǎo)致背景偏高。
3. 孵育時(shí)間、孵育溫度
孵育時(shí)間過長 、溫度過高，也可能會(huì)導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加，從而造成本底增高。
4. 洗板液成分、洗板的時(shí)間
一般用 PBS 洗板就可以了，但有時(shí)候可以在洗板液中加入一些表面活性劑，如 tween-20。
洗板的時(shí)間不足，會(huì)導(dǎo)致抗體殘留，引起陰性對(duì)照顯色。如果是機(jī)洗，可以改為手洗少量嘗試，增加洗板時(shí)間。機(jī)洗一般沒有手洗去除干凈。
5. 顯色時(shí)間
由于系統(tǒng)優(yōu)化不好，導(dǎo)致樣品顯色較弱，而延長了顯色時(shí)間，這樣一來導(dǎo)致陰性對(duì)照也有部分顯色。此時(shí)，應(yīng)該優(yōu)化檢測(cè)系統(tǒng)，調(diào)整包被物、檢測(cè)抗體、底物等的濃度，縮短顯色時(shí)間，顯色一般不超過 15 min。
6. 樣品
樣品中含有干擾物質(zhì)。此時(shí)可以優(yōu)化系統(tǒng)，調(diào)整其他檢測(cè)抗體的比例，而增加樣品的稀釋度、增加洗脫步驟等。
7. ELISA 板的選擇
聚苯乙烯制備的 ELISA 板經(jīng)射線照射后，其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附性能增加，應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值較大。
與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。作為 ELISA 固相載體的一種，聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄，可剪割，價(jià)廉，但光潔度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
