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質(zhì)粒載體選擇主要考慮哪些因素嗎?
把一個(gè)有用的基因（目的基因——研究或應(yīng)用基因）通過基因工程手段送到生物細(xì)胞（受體細(xì)胞），需要運(yùn)載工具（交通工具）攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞，這種運(yùn)載工具就叫做載體（vector）。
P.S. 基因工程所用的 vector 實(shí)際上是 DNA 分子，是用來攜帶目的基因片段進(jìn)入受體細(xì)胞的 DNA。
選擇載體主要依據(jù)構(gòu)建的目的，同時(shí)要考慮載體中應(yīng)有合適的限制酶切位點(diǎn)。如果構(gòu)建的目的是要表達(dá)一個(gè)特定的基因，則要選擇合適的表達(dá)載體。
載體選擇主要考慮下述 3 點(diǎn)：
1. 構(gòu)建 DNA 重組體的目的，克隆擴(kuò)增/表達(dá)表達(dá)，選擇合適的克隆載體/表達(dá)載體。
2. 載體的類型：
克隆載體的克隆能力－據(jù)克隆片段大�。ù筮x大，小選�。Ｈ�<10kb 選質(zhì)粒。
表達(dá)載體據(jù)受體細(xì)胞類型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳類細(xì)胞表達(dá)載體。
對(duì)原核表達(dá)載體應(yīng)該注意 3 點(diǎn)：選擇合適的啟動(dòng)子及相應(yīng)的受體菌；用于表達(dá)真核蛋白質(zhì)時(shí)注意克服 4 個(gè)困難和閱讀框錯(cuò)位；表達(dá)天然蛋白質(zhì)或融合蛋白作為相應(yīng)載體的參考。
3. 載體 MCS 中的酶切位點(diǎn)數(shù)與組成方向因載體不同而異，適應(yīng)目的基因與載體易于鏈接，不產(chǎn)生閱讀框架錯(cuò)位。
選用質(zhì)粒（常用）做載體的 4 點(diǎn)要求：
選分子量小的質(zhì)粒，即小載體（1－1.5 kb）→不易損壞，在細(xì)菌里面拷貝數(shù)也多（也有大載體）；
一般使用松弛型質(zhì)粒在細(xì)菌里擴(kuò)增不受約束，一般 10 個(gè)以上的拷貝，而嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒 < 10 個(gè)。
必需具備一個(gè)以上的酶切位點(diǎn)，有選擇的余地；
必需有易檢測(cè)的標(biāo)記，多是抗生素的抗性基因，不特指多位 Ampr（試一試）。
無論選用哪種載體，首先都要獲得載體分子，然后采用適當(dāng)?shù)南拗泼笇⑤d體 DNA 進(jìn)行切割，獲得分子，以便于與目的基因片段進(jìn)行連接。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
