企業(yè)檔案
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ELISA試劑盒
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遠(yuǎn)慕簡(jiǎn)介:質(zhì)粒,那些你不知道的小知識(shí)?
質(zhì)粒組成要素
一個(gè)合格的質(zhì)粒含有以下組成部分：
復(fù)制起始位點(diǎn) Ori 即控制復(fù)制起始的位點(diǎn)。原核生物 DNA 分子中只有一個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)。而真核生物 DNA 分子有多個(gè)復(fù)制起始位點(diǎn)�？股乜剐曰� 可以便于加以檢測(cè)，如 Amp+ 、Kan+。多克隆位點(diǎn) MCS 克隆攜帶外源基因片段P/E, 啟動(dòng)子/增強(qiáng)子Terms 終止信號(hào)加 poly（A）信號(hào), 可以起到穩(wěn)定 mRNA 作用.
如何閱讀質(zhì)粒圖譜
步：首先看 Ori 的位置，了解質(zhì)粒的類型（原核/真核/穿梭質(zhì)粒）。
第二步：再看篩選標(biāo)記，如抗性，決定使用什么篩選標(biāo)記。
Ampr 水解β－內(nèi)酰胺環(huán)，解除氨芐的毒性。
tetr 可以阻止四環(huán)素進(jìn)入細(xì)胞。
camr 生成氯霉素羥乙�；苌�，使之失去毒性。
neor（kanr）氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶 使 G418（長(zhǎng)那霉素衍生物）失活
hygr 使潮霉素β失活。
第三步：看多克隆位點(diǎn)（MCS）。它具有多個(gè)限制酶的單一切點(diǎn)。便于外源基因的插入。如果在這些位點(diǎn)外有外源基因的插入，會(huì)導(dǎo)致某種標(biāo)志基因的失活，而便于篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源 DNA 插入片段大小。質(zhì)粒一般只能容納小于 10Kb 的外源 DNA 片段。一般來(lái)說，外源 DNA 片段越長(zhǎng)，越難插入，越不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化效率越低。
第五步：是否含有表達(dá)系統(tǒng)元件，即啟動(dòng)子－核糖體結(jié)合位點(diǎn)－克隆位點(diǎn)－轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)。這是用來(lái)區(qū)別克隆載體與表達(dá)載體�？寺≥d體中加入一些與表達(dá)調(diào)控有關(guān)的元件即成為表達(dá)載體。選用那種載體，還是要以實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑闇?zhǔn)繩。
啟動(dòng)子－核糖體結(jié)合位點(diǎn)－克隆位點(diǎn)－轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)
啟動(dòng)子－促進(jìn) DNA 轉(zhuǎn)錄的 DNA 順序，這個(gè) DNA 區(qū)域常在基因或操縱子編碼順序的上游，是 DNA 分子上可以與 RNApol 特異性結(jié)合并使之開始轉(zhuǎn)錄的部位，但啟動(dòng)子本身不被轉(zhuǎn)錄。
增強(qiáng)子/沉默子－為真核基因組（包括真核病毒基因組）中的一種具有增強(qiáng)鄰近基因轉(zhuǎn)錄過程的調(diào)控順序。其作用與增強(qiáng)子所在的位置或方向無(wú)關(guān)。即在所調(diào)控基因上游或下游均可發(fā)揮作用。/沉默子－負(fù)增強(qiáng)子，負(fù)調(diào)控序列。
核糖體結(jié)合位點(diǎn)/起始密碼/SD 序列（Rbs/AGU/SDs）：mRNA 有核糖體的兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，對(duì)于原核而言是 AUG（起始密碼）和 SD 序列。
轉(zhuǎn)錄終止順序（終止子）/翻譯終止密碼子：結(jié)構(gòu)基因的*后一個(gè)外顯子中有一個(gè) AATAAA 的保守序列，此位點(diǎn) down－stream 有一段 GT 或 T 富豐區(qū)，這 2 部分共同構(gòu)成 poly（A）加尾信號(hào)。結(jié)構(gòu)基因的*后一個(gè)外顯子中有一個(gè) AATAAA 的保守序列，此位點(diǎn) down－stream 有一段 GT 或 T 富豐區(qū)，這 2 部分共同構(gòu)成 poly（A）加尾信號(hào)。
為什么質(zhì)粒圖譜上有的箭頭順時(shí)針有的箭頭逆時(shí)針，那其實(shí)是代表兩條 DNA 鏈，即質(zhì)粒是環(huán)狀雙鏈 DNA，它的啟動(dòng)子等在其中一條鏈上，而它的抗性基因在另一條鏈上。
原創(chuàng)作者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司
