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線性PEI轉染試劑- KE1082
點擊次數(shù)：0發(fā)布時間：2019/7/10 15:56:16
更新日期：2019/7/10 15:56:16
所 在 地：中國大陸
產品型號：
優(yōu)質供應
詳細內容
包裝規(guī)格：0.1ml
儲存條件：4℃
產品概述 ：
線性PEI轉染試劑是一種陽離子聚合物，它能與核酸形成復合物，并使該復合 物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉染試劑廣泛適用于常見細胞系，如 HEK-293、HEK293T、 Hep G2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3 和 Sf9 等。該試劑即使在有血清存在的情況下， 它仍然能高效的將核酸導入細胞。
線性PEI轉染試劑具有如下優(yōu)點：
優(yōu)越的轉染效率
重組蛋白的高表達水平
與含血清的培養(yǎng)基相兼容
低細胞毒性，易于操作
質量控制：
每批次線性PEI轉染試劑均經過轉染測試。將 eGFP 表達質粒用 PEI轉染試劑轉入亞融合狀態(tài)的293T細胞，轉染 16 h 后， 超過 95%的細胞表達 eGFP。
注意事項 ：
一．質粒質量，請務必使用高質量轉染級無內毒素質粒。通過 260 nm 光吸收測定 DNA 濃度，260 nm / 280 nm 比值確定 DNA 純度（比值應該在 1.8~2.0 的范圍之內）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。
二．細胞條件，使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO公司血清培養(yǎng)細胞。
瞬時轉染方法
一． 接種細胞， 轉染前一天，用膠原酶消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。
二．準備 DNA-PEI 復合物， DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 2-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 Falcon 5 mL /14 mL 離心管。
三．轉染細胞，直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染 3 h 后，添加1/2體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。
四．孵育細胞和分析結果，在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后*快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定*適合檢測時間。
穩(wěn)定轉染方法
一．接種細胞，轉染前一天，用胰酶消化細胞并計數(shù)。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。
二．準備 DNA-PEI 復合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 2-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙 烯管，例如 Falcon 5 mL /14 mL 離心管。
三．轉染細胞，直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染 3 h 后，添加1/2體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。
四．孵育細胞和分析結果： 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后*快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。
五．轉染 24 h 后，將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。
特別提醒
一． 對于某些類型的細胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為 70~80%。
二．對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。
三． 即使在有蛋白（如 10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉染細胞，但是 DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用 Opti-MEM ITM 培養(yǎng)基以達到轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。
四．對大多數(shù)細胞而言，每1ug使用3.0ulKingmorn® DNA transfection reagent轉染試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每 1 ugDNA 使用 1~4 ul體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化。
五．參考用量
| 細胞培養(yǎng)容器 | 表面積 | 稀釋液體積 | DNA的量 | PEI溶液的量 | 培養(yǎng)基總量 |
| 96-well | 0.3cm2 | 10uL | 0.1ug | 0.1uL | 100uL |
| 48-well | 0.7cm2 | 20uL | 0.2ug | 0.3uL | 200uL |
| 24-well | 1.9cm2 | 50uL | 0.5ug | 1uL | 500uL |
| 12-well | 3.8cm2 | 50uL | 1ug | 2uL | 1mL |
| 6-well/35mmdish | 10cm2 | 100uL | 2ug | 4uL | 2mL |
| 60mm dish/T25flask | 21cm2 | 200uL | 4ug | 8uL | 4mL |
| 100mmdish/T75flask | 58cm2 | 500uL | 10ug | 20uL | 10mL |
