產品展示
EZ細胞及動物組織DNA直擴PCR試劑盒
點擊次數：4發(fā)布時間：2019/2/26 12:48:26
更新日期：2019/3/27 9:32:56
所 在 地：中國大陸
產品型號：
優(yōu)質供應
詳細內容
產品名稱：EZ細胞及動物組織DNA直擴PCR試劑盒
英文名稱：EZ Cell ａnd Tissue DNA Direct PCR Kit
產品規(guī)格：50T/200T
產品價格：420/1350元
試劑盒產品用途：
動物組織或細胞DNA的擴增與克隆、轉基因細胞株篩選、DNA病毒基因擴增、DNA病毒普通PCR診斷、DNA病毒Real-time PCR診斷（Taqman法）等。
試劑盒組成：
DNA-EZ-1、DNA-EZ-2、DNA-EZ-3、2×TaqMix、H2O
保存條件：
-20ºC保存。使用前將DNA-EZ-1、DNA-EZ-3在室溫或37ºC充分溶解。DNA-EZ-2和2×TaqMix需置于冰上。
使用方法：
1、細胞或組織樣品中DNA的擴增
1 將DNA-EZ-1與DNA-EZ-2以5：1的比例充分混合。
2 取20 µL細胞樣品（105-106 cells/mL）或研磨的組織樣品，加入6 µL上述混合液，混勻。
3 置于50ºC靜置10分鐘后，再置于95ºC加熱10分鐘。
4 加入50 μL的DNA-EZ-3，混勻。
5 取2 μL上述處理液進行PCR擴增。
2、組織塊中DNA的擴增
1 用H2O將DNA-EZ-1稀釋5倍，每25 μL的DNA-EZ-1稀釋液加入1 μL的DNA-EZ-2，混合均勻。
2 切取半顆米粒大小的組織塊（< 3 mm3），并完全浸入上述混合液中。
3 50ºC加熱30分鐘，每隔10分鐘取出混勻一次。
4 95ºC加熱10分鐘。
5 加入50 μL的DNA-EZ-3，混勻。
6 取2 μL上述處理液進行PCR擴增。
3、Real-time PCR
取上述細胞或組織處理液，加入特異性引物和Taqman探針，可進行特異性靶標DNA的絕對定量檢測。
取上述細胞或組織處理液，加入SYBR Green PCR試劑（需自備），可進行特異性靶標DNA的相對定量檢測。
4、PCR加樣體系
| 成分 | 25 μL體系（推薦） | 50 μL體系 |
| 2×TaqMix | 12.5 μL | 25 μL |
| Forward Primer (10 μM) | 1 μL | 2 μL |
| Reverse Primer (10 μM) | 1 μL | 2 μL |
| Template DNA | 2 μL | 2 μL |
| H2O | 8.5 μL | 19 μL |
5、PCR程序設定
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 |
| 預變性 | 94℃ | 5 min |
|
| 變性 | 94 ℃ | 30 s |
30-35 |
| 退火 | 50~72℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 1 kb/min | |
| *終延伸 | 72 ℃ | 10 min |
|
|
| 4℃ | Hold |
|
（1）取樣的細胞量應當適中，濃度不宜過高或過低，處理后溶液應當以透明為宜。
（2）樣品處理過程中應當防止交叉污染，推薦設置陰性對照參與處理過程，以檢測環(huán)境的污染。
（3）PCR的退火溫度可根據引物的預測Tm值減去5ºC，或者通過梯度PCR摸索較佳退火溫度。
（4）上述步驟同樣適用于相應的細胞或組織中DNA病毒的PCR診斷。在進行組織中DNA病毒的診斷時，為保證準確度，推薦將病料組織研磨后再進行上述處理和擴增。
（5）TaqMix中加入了染料和相應試劑，普通PCR后可直接進行電泳，無需另加Loading buffer。
（6）處理96孔板中的細胞時，可如“組織塊DNA擴增”第1步中的方法，配置裂解液后，使用排槍直接加入96孔板裂解細胞，實現高通量操作。
（7）TaqMix中的染料不影響Taqman探針的效果。
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