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實驗新手自己講解elisa試劑盒流程
點擊次數(shù):347 發(fā)布時間:2017/10/26
注意事項:
1.如果一次只做一部分孔,貼膜可以剪刀剪開,只用一部分。保證膜可以把加液后的孔蓋住就可以。
2.加樣時候,一定要保證每孔加樣量完全一樣。避免因為操作原因,每孔液體量有區(qū)別。ELISA比較敏感,操作誤差會導(dǎo)致*后讀數(shù)有不小的差別。
3.加的樣,elisa試劑盒保證樣品加在孔底,不要粘在管壁上,減少孔與孔之間的差異。
第二天早上,來洗掉包被液。
注意事項:
1. ELISA用的所有液體系統(tǒng),記得一定要預(yù)先調(diào)PH值到7.2-7.4之間,按照說明書都無菌過濾過。1XPBS的PH值在7.68左右,仍然需要加鹽酸調(diào)酸一點。Trizma base配出來,PH在9.98,必須調(diào)PH!否則ELISA中抗原抗體根本不能正常結(jié)合。蛋白對于PH值極度敏感。
2. elisa試劑盒無菌要求多高,現(xiàn)在不知道。建議無菌配好的液體放在4度冰箱保存。每次用之前,放在室溫下至少15分鐘。ELISA用的液體,室溫的溫度,效果比較好。
洗包被液的時候,直接把板子翻過來,棄掉液體。在厚厚的吸水紙上,用力拍打板子,力求把孔中的液體完全棄干凈。
用WASH BUFFER洗滌三次。因為孔的容量是400UL,但是300UL基本就可以把孔覆蓋滿。所以,建議洗板子的時候,每孔加350ul左右。
注意事項:
1.每次洗滌的時候,盡量拍干孔中液體。這樣洗滌得比較干凈。
2. 孔中沒有液體時候,動作一定要快。!ELISA包被后的孔,絕對不能干掉!否則非常影響結(jié)果。
3.封閉。
1.用是1%BSA in 1XPBS. 無菌過濾,elisa試劑盒4度保存,用之前放在室溫復(fù)溫。
2.封閉液可以封閉全孔,所以每孔加300UL封閉液,室溫1小時。