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ELISA四大常用方法優(yōu)缺點(diǎn)比較
點(diǎn)擊次數(shù)：661 發(fā)布時(shí)間：2017/10/16
1.直接法（direct ELISA）
ELISA試劑盒將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一級(jí)抗體，即可測(cè)定抗原總量，此一級(jí)抗體的特異性非常重要。
優(yōu)勢(shì)：操作手續(xù)簡(jiǎn)短，因無(wú)須使用二抗可避免交互反應(yīng)。
缺點(diǎn)：試驗(yàn)中的一抗都得用酶標(biāo)記，但不是每種抗體都適合做標(biāo)記，費(fèi)用相對(duì)提高。
2.間接法（indirect ELISA）
此測(cè)定方法與直接法類(lèi)似，差別在于一級(jí)抗體沒(méi)有酶標(biāo)記，改用酶標(biāo)記的二級(jí)抗體去辨識(shí)一級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原量。
優(yōu)勢(shì)：二抗可以加強(qiáng)信號(hào)，而且有多種選擇能做不同的測(cè)定分析。不加酶標(biāo)記的一級(jí)抗體則能保留它*多的免疫反應(yīng)性。
缺點(diǎn)：交互反應(yīng)發(fā)生的機(jī)率較高。
3.雙抗體夾心法（sandwich ELISA）
被檢測(cè)的抗原包被在兩個(gè)抗體之間，ELISA試劑盒其中一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測(cè)抗體，此抗體可用酶標(biāo)記后直接測(cè)定抗原的量；或不標(biāo)記，再透過(guò)酶標(biāo)記的二級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取，才可避免交互反應(yīng)或競(jìng)爭(zhēng)相同的抗原結(jié)合部位。
優(yōu)勢(shì)：高靈敏、高專(zhuān)一性，抗原無(wú)須事先純化。
缺點(diǎn)：抗原一定得擁有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位。
4.競(jìng)爭(zhēng)法（competitive ELISA）
樣本里的抗原（自由抗原）和純化并固定在固相載體上的抗原（固定抗原）一起競(jìng)爭(zhēng)相同的抗體，當(dāng)樣品里的自由抗原越多，就可以結(jié)合越多的抗體，而固定抗原就只能結(jié)合到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清洗步驟，洗去自由抗原和抗體的復(fù)合物，只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物，ELISA試劑盒拿來(lái)與只有固定抗原的對(duì)照組結(jié)果相比較，根據(jù)呈色差異就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。
優(yōu)勢(shì)：可適用比較不純的樣本，而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
缺點(diǎn)：整體的敏感性和專(zhuān)一性都較差。
