ELISA試劑盒檢驗方法詳解：

（1）使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

（2）取所需用量酶標板條，設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

（3）空白對照孔加樣品稀釋液100μl，陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl，樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

（4）混勻，置37℃反應30分鐘。

（5）扣去孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。

（6）每孔加酶標記物100μl（空白孔除外），置37℃反應30分鐘。

（7）洗滌，同步驟5。

（8）每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應10分鐘。

（9）每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

ELISA試劑盒實驗加樣須注意如下問題：

1、吸取樣品時，加樣槍吸頭不應黏附多余的液體，加樣時不可90度向孔中滴加液體，這樣會導致液體殘留在吸頭上，加樣不準確。

2、不要將吸頭伸入孔中，一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭，另一方面可能會將孔中的液體吹起來，加樣不準確。

3、正確的加樣方法應為45度，吸頭貼著孔壁加入，應注意：

1）角度太小，會使液體殘留在孔壁上，導致加樣不準確。

2）吸頭應當貼著管壁和液面的交界處。

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