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影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染試驗(yàn)的因素有哪些?

點(diǎn)擊次數(shù):310 發(fā)布時(shí)間:2017/6/2
   轉(zhuǎn)染,是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入,細(xì)胞轉(zhuǎn)染目前已面為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。細(xì)胞轉(zhuǎn)染的途徑大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類。物理介導(dǎo):電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例。化學(xué)介導(dǎo):方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)。生物介導(dǎo):方法有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),是目前轉(zhuǎn)染效率的方法,同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢(shì)。但是,病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜,常常對(duì)細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性,在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,則各有其特點(diǎn)。

  無(wú)論采用哪種轉(zhuǎn)染技術(shù),要獲得*優(yōu)的轉(zhuǎn)染結(jié)果,可能都需要對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化。影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多,從細(xì)胞類型、細(xì)胞培養(yǎng)條件和細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),到轉(zhuǎn)染方法的操作細(xì)節(jié),都需要考慮。愛測(cè)智能科技總結(jié)出影響轉(zhuǎn)染試驗(yàn)的因素主要有以下幾個(gè):

  1.轉(zhuǎn)染試劑
不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同,但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要,因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn),通過這些資料可選擇*適合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑。

  2.細(xì)胞狀態(tài)
一般低的細(xì)胞代數(shù)

  3.轉(zhuǎn)染方法
不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法,但大多大同小異。轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)根據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法,但也要注意,因不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞性質(zhì)不同,質(zhì)粒定量差異,操作手法上的差異等,其轉(zhuǎn)染效果可能不同,應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件來確定*佳轉(zhuǎn)染條件。

  4.載體構(gòu)建
轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建(病毒載體,質(zhì)粒DNA,RNA,PCR產(chǎn)物,核苷酸等)也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。病毒載體對(duì)特定宿主細(xì)胞感染效率較高,但不同病毒載體有其特定的宿主,有的還要求特定的細(xì)胞周期,如逆轉(zhuǎn)錄病毒侵染分裂期的宿主細(xì)胞,此外還需考慮一些安全問題(如基因污染)。除載體構(gòu)建外,載體的形態(tài)及大小對(duì)轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響,如前面提到的超螺旋及線性DNA對(duì)瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響。如果基因產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞有毒性作用,轉(zhuǎn)染也很難進(jìn)行,因此選擇組成或可調(diào)控,強(qiáng)度合適的啟動(dòng)子也很重要,同時(shí)做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對(duì)照可排除毒性影響的干擾。

 

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