另一方面，在胞吐、染料與神經(jīng)遞質(zhì)一起從囊泡中釋放，從而導(dǎo)致熒光信號的降低。因此，熒光的變化強(qiáng)度反映了胞吞/胞吐或突觸活動的量。這個內(nèi)吞過程中熒光增加的速率，“開啟速率”和胞吐過程中的熒光減少，即“脫落率”，因染料而異。在里面一般來說，具有較長親脂性尾部和較多雙鍵的染料具有較高的對膜的親和力，從而具有較高的開啟速率和較低的關(guān)閉速率。一些苯乙烯基染料可以通過離子通道進(jìn)入細(xì)胞。突觸綠C18具有長碳鏈，不能通過離子通道，已被用作區(qū)分染料吸收機(jī)制的對照。突觸綠色和突觸紅色是不可修復(fù)的。AM和HM染料是醛固定性神經(jīng)末端染料。

當(dāng)使用神經(jīng)末梢染料時，研究人員經(jīng)常遇到的一個問題是非特異性膜染色引起的背景熒光。盡管大多數(shù)背景熒光可以通過反復(fù)洗滌來去除，問題是對于具有較長尾部或更多雙鍵的染料仍然很重要，特別是當(dāng)染料用于組織制劑時。Biotium提供各種背景用于神經(jīng)末梢染料的還原劑。ADVASEP-7是一種磺化β-環(huán)糊精，有助于在洗滌過程中去除染料。SCAS淬火

無需重復(fù)wsh步驟的膜結(jié)合染料的熒光. 磺基羅丹明101是一種能猝滅背景的紅色熒光染料通過FRET從綠色神經(jīng)末端染料發(fā)出熒光（5）。Biotium還提供神經(jīng)終端染色套件，包括染料和背景還原劑。

艾美捷SynaptoGreen C4#70020圖例分析：

圖1：突觸綠C4的吸收和發(fā)射光譜在脂質(zhì)體中。其他突觸綠色染料的光譜相似

圖2：突觸紅C2在脂質(zhì)體。其他突觸紅染料的光譜相似

SynaptoGreen C4化驗方案：

以下是培養(yǎng)的神經(jīng)末梢染色方案的一個例子蓋玻片上的神經(jīng)元。神經(jīng)末端染料也可用于標(biāo)記內(nèi)吞作用非神經(jīng)元細(xì)胞類型中的囊泡。染色可以在4℃下進(jìn)行C表示選擇性質(zhì)膜的標(biāo)記；室溫或37度C、 細(xì)胞內(nèi)吞作用染色通常在10分鐘內(nèi)發(fā)生�？梢允褂贸齌yrode溶液以外的緩沖液習(xí)慣于添加鈉通道阻斷劑河豚毒素（TTX）是可選的，其目的是阻斷動作電位，防止突觸小泡在染色�？赡苄枰_定特定應(yīng)用的適合協(xié)議由用戶進(jìn)行；參見參考文獻(xiàn)，了解腦切片染色方案的示例，以及其他細(xì)胞類型。

1.在50mM蒂羅爾中將神經(jīng)末梢染料稀釋至終濃度為4uM解決方案將蓋玻片與細(xì)胞一起放入此溶液中1分鐘室溫。使用足夠的溶液將細(xì)胞完全浸沒。

2.將蓋玻片轉(zhuǎn)移到Tyrode+0.5μM河豚毒素（TTX，目錄號。00061）溶液在室溫下攪拌1分鐘。

3.在室溫下，用Tyrode+TTX清洗蓋玻片數(shù)次。

注：為了減少背景，可以使用1mM ADVASEP-7（目錄號70029）添加到洗滌溶液中�；蛘�，SCAS（目錄號70037）可以是用于在不重復(fù)洗滌的情況下驟冷背景。培養(yǎng)蓋玻片在室溫下在Tyrode+TTX+0.5mM SCAS中保持4分鐘。

4.將蓋玻片安裝在Tyrode+TTX中并進(jìn)行成像。注：對于SynaptoGreen染料，50μM磺基羅丹明101（目錄no.80101），以猝滅細(xì)胞外熒光。

注意：SynaptoGreen和SynaptoRed染料不可固定。AM和HM染料（見相關(guān)產(chǎn)品）是可固定醛的神經(jīng)末梢染料。

參考文獻(xiàn)：

1. Vida, TA ａnd Emr, SD. J. Cell Biol 128, 779(1995).

2. Meyers, JR, et al. J Neurosci., 23, 4054(2003).

3. Kay, AR, et al. Neuron 24, 809 (1999).

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5. Pyle, JL, et al. Neuron 24, 803 (1999).

來源：https://www.amyjet.com/products/BTM-70020.shtml