腫瘤誘導(dǎo)中性粒細胞胞外陷阱（NETs）形成

起初研究者們認(rèn)為，在多種刺激 (如病原微生物及其產(chǎn)物、手術(shù)壓力、缺氧等) 下，會引發(fā) NETs，而現(xiàn)在對多種腫瘤 (包括乳腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、食管胃腺癌和肺癌等) 的研究都證明了腫瘤能創(chuàng)造促進 NETs 釋放的系統(tǒng)性微環(huán)境。

事實上，在沒有其他任何刺激的情況下，腫瘤自身便能誘發(fā) NETs 形成，從而促進轉(zhuǎn)移進展。該作用可能部分歸因于原發(fā)瘤精心制作的細胞因子。如腫瘤產(chǎn)生的粒細胞集落刺激因子 (G-CSF) 和白介素8 (IL-8)，能與 GROα 或 GROβ 相互配合，從而促使 NETs 形成。此外，腫瘤來源的外泌體能誘導(dǎo) NETs 釋放，而 NETs 也可以招募腫瘤來源的外泌體。

艾美捷中性粒細胞胞外捕獲物（NET）檢測#601010提供了一種不依賴于DNA的檢測NET形成的方法，通過一種彈性酶的底物，來檢測中性粒細胞彈性酶的酶活，從而反映NET的形成.

Cayman NETosis檢測試劑盒為體外研究NETosis過程提供了一種簡單快速的方法。值得注意的是，Cayman的NETosis檢測試劑盒不依賴于NETs的DNA成分，因為DNA釋放可以獨立于NETosis發(fā)生。在該試劑盒中，用PMA或鈣離子載體（均包括在內(nèi)）刺激原代中性粒細胞釋放NETs。如圖1所示，未結(jié)合的中性粒細胞彈性蛋白酶在NET生成后被沖走。在通過S7核酸酶消化NET DNA之后，將含有中性粒細胞彈性蛋白酶的上清液添加到底物中，該底物被中性粒細胞彈性蛋白酶選擇性切割以產(chǎn)生吸收405nm光的4-硝基苯胺產(chǎn)物。提供足夠量的每種試劑來測試和分析多達80個單獨的樣品或24個一式兩份的樣品。

中性粒細胞胞外捕獲物（NET）檢測試劑制備：

1.NET測定緩沖液（試劑盒中未包含的基礎(chǔ)培養(yǎng)基）將500 ml RPMI 1640基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基（未提供）與5 g牛血清白蛋白測定試劑（試劑盒編號400086）和500 ul氯化鈣（1M）測定試劑（溶劑盒編號400087）混合制備NET測定緩沖溶液。NET測定緩沖液不是用來殺菌的，也不需要在組織培養(yǎng)罩中制備或使用。在細胞刺激和添加核酸酶之，將NET測定緩沖溶液預(yù)熱至37℃，以確�？焖偌せ詈碗S后的核酸酶活性。儲存未使用的NET分析緩沖液、無菌過濾器、等分試樣，并儲存在-20℃。注意：血清中含有能消化NETS的DNASE，應(yīng)避免使用。

2.PMA（1 mm）檢測試劑-（項目編號400145）使用，將1 ul PMA（1MM）檢測試劑添加到5 ml預(yù)熱的NET檢測緩沖液中，制成10X工作儲備溶液注：PMA是一種潛在致癌物。處理此解決方案時，請穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o措施并謹(jǐn)慎使用。

3.A23187（25 MM）含量測定試劑-（項目編號400085）使用，將10 ul A23187【25 MM】含量測定試劑加入1 ml預(yù)熱的凈含量測定緩沖液中，制成10X工作儲備溶液。

4.S7核酸酶測定試劑（項目編號601011對于一個24孔板，在使用立即在12 ml預(yù)熱的NET測定緩沖液中稀釋12 ul S7核酸酶檢測試劑（供應(yīng)量為15000 U/ml），制成15 U/ml工作溶液

5.NET含量測定中性粒細胞彈性蛋白酶底物（項目編號601013）小瓶中含有15 MM N-甲氧基琥珀酰-ala-la-pro-val對硝基苯胺，這是中性粒細胞彈性蛋白酶的底物。為了測定24個樣品，一式兩份，并使用標(biāo)準(zhǔn)曲線，將225 UI NET測定中性粒細胞彈性蛋白酶底物稀釋到6.5 ml PBS中（1:30稀釋）。

來源：https://www.amyjet.com/products/601010-1.shtml