膜聯蛋白V是具有血管抗凝血活性的鈣和磷脂結合蛋白家族的成員。體外實驗結果表明，它可能通過與凝血酶原競爭磷脂酰絲氨酸（PS）結合位點而在抑制凝血中發(fā)揮作用。在健康細胞中，PS通常保存在細胞膜的內小葉（胞質側）。當細胞發(fā)生凋亡時，早的可檢測指標是膜不對稱性的喪失。PS不再局限于膜的胞質部分，而是轉移到外小葉，并暴露在細胞表面。免疫化學技術公司的牛膜聯蛋白V-熒光素細胞凋亡檢測試劑盒提供了一種經驗證的方法，可使用重組熒光素結合的牛膜連蛋白V和碘化丙啶（PI）快速、輕松地區(qū)分兩個死亡細胞群和活細胞群。具有完整細胞膜和表面暴露PS（凋亡的一個顯著特征）的細胞將被膜聯蛋白V-熒光素染色為陽性。PI包含在試劑盒中，用于識別已喪失質膜完整性的晚期凋亡細胞。這些細胞將被膜聯蛋白V-熒光素和碘化丙啶雙重標記（綠色和紅色熒光）。假設沒有治療或細胞周期相關事件暫時暴露正常內化的帶負電荷的PS實體，具有完整質膜的活的非凋亡細胞將排除PI，并且將保持不被膜聯蛋白V-熒光素探針染色。該試劑盒還包括一種特殊配制的鈣基結合緩沖液，這是發(fā)生膜聯蛋白V結合所需的。使用流式細胞儀分析結果。

ImmunoChemistry艾美捷牛膜聯蛋白V-熒光素凋亡檢測試劑盒化學性質：

靶細胞凋亡

激發(fā)/發(fā)射膜聯蛋白V-熒光素–494 nm/521 nm PI–536 nm/617 nm

分析方法流式細胞術

樣品類型細胞培養(yǎng)

儲存2-8°C

協議：

準備樣品和對照品。

用DiH2O稀釋10X結合緩沖液1:10。

在冰冷的培養(yǎng)基或PBS中清洗細胞兩次，然后以5 x 105–1 x 106細胞/mL的速度重新懸浮在冰冷的1X結合緩沖液中。

在1mL膜聯蛋白重組緩沖液（1X）中重組牛膜聯蛋白V-熒光素。

在PBS中稀釋重組膜聯蛋白V-熒光素1:5。

將稀釋的Annexin V-Fluorescein以約1:10添加到每個樣品中。

在PBS中稀釋PI 1:10。

以約1:20的比例向每個樣品中加入稀釋的PI。

在冰上孵育15分鐘，避光。

向每個樣本添加400µL 1X綁定緩沖液。

用流式細胞儀分析。膜聯蛋白V-熒光素在494nm激發(fā)，在521nm發(fā)射。PI在536nm激發(fā)，在617nm發(fā)射。

ImmunoChemistry艾美捷牛膜聯蛋白V-熒光素凋亡檢測試劑盒組分：

Bovine Annexin V-Fluorescein, lyophilized, 1 vial, #6641

Annexin Reconstitution Buffer, 1X, 1 mL, 1 vial, #6639

Annexin Binding Buffer, 10X, 10 mL, 3 bottles, #6640

Propidium Iodide, 250 µg/mL, 1 mL, 1 vial, #638

ImmunoChemistry Technologies簡稱"ICT",提供各種細胞蛋白酶、細胞凋亡與細胞毒性檢測試劑盒等研究工具，同時包含高質量高靈敏度的 ELISA開發(fā)試劑。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質的產品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Immunochemistry.shtml