綠色活/死染色是一種用于區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞的不透膜熒光活性染色劑。這種綠色活/死染色劑是一種重要的染料，具有完整的細(xì)胞膜排斥特性，類似于流行的紅色熒光活性染料碘化丙啶（PI）、7-氨基放線菌素D（7-AAD）和DRAQ7™. 與紅色熒光DNA染料一樣，綠色活/死染色因其性而被排除在完整的健康細(xì)胞之外。在存在表現(xiàn)出受損膜完整性的細(xì)胞時(shí)，綠色活/死染色穿透細(xì)胞和核膜屏障，并以類似于PI和7-AAD的方式緊密插入DNA。當(dāng)與DNA結(jié)合時(shí)，它在綠色發(fā)射范圍內(nèi)獲得大增強(qiáng)的熒光電勢(shì)（>2000X）。這些重要的重要染料特性使綠色活/死染色能夠用于基于流式細(xì)胞術(shù)的方案和顯微鏡分析技術(shù)，以評(píng)估樣本細(xì)胞群中晚期凋亡、壞死和膜受損細(xì)胞的百分比。綠色熒光發(fā)射允許新的染料組合用于理解細(xì)胞死亡和凋亡，例如與紅色SR-FLICA®檢測(cè)、遠(yuǎn)紅色FLICA 660半胱天冬酶檢測(cè)和其他可見(jiàn)范圍熒光標(biāo)記配體一起使用。綠色活/死染色只染色死細(xì)胞和滲透細(xì)胞的細(xì)胞核。綠色活/死染色不會(huì)進(jìn)入完整的活細(xì)胞。細(xì)胞可以固定或滲透，以使用綠色活/死染色作為核復(fù)染劑。綠色活/死染色的毒性可忽略不計(jì)，可用于長(zhǎng)期生存能力測(cè)定，以評(píng)估細(xì)胞毒性和細(xì)胞凋亡。對(duì)于顯微鏡應(yīng)用，綠色活/死染色將作為IF、IHC、高含量篩選和基于細(xì)胞的分析中固定細(xì)胞和組織樣本的DNA復(fù)染劑。

ImmunoChemistry艾美捷綠色活/死染色試劑化學(xué)性質(zhì)：

目標(biāo)死亡細(xì)胞，壞死

當(dāng)與核酸結(jié)合時(shí)，激發(fā)/發(fā)射495 nm/>512 nm

分析方法流式細(xì)胞術(shù)、熒光顯微鏡

樣品類型細(xì)胞培養(yǎng)

儲(chǔ)存-20°C

以500µM提供

ImmunoChemistry艾美捷綠色活/死染色試劑流式細(xì)胞術(shù)：

每個(gè)50µL小瓶足以進(jìn)行1000次流式細(xì)胞儀測(cè)試。

在微型離心機(jī)中短暫旋轉(zhuǎn)解凍的小瓶，以去除可能被困在瓶蓋中的任何試劑。

在PBS中稀釋1:100的綠色活/死染色濃縮儲(chǔ)備溶液（500µM），以制備5000 nM的工作溶液。例如，向990µL PBS中加入10µL儲(chǔ)備濃縮液。只準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)所需的東西。應(yīng)立即使用工作溶液，并丟棄任何剩余的稀釋溶液。

用1:100稀釋的5000 nM工作溶液加標(biāo)樣品。例如，用5µL工作溶液加標(biāo)0.495 mL樣品。

在室溫下避光培養(yǎng)樣品約10分鐘。

使用488nm藍(lán)色激光和530/30（FL1）發(fā)射濾光片設(shè)置或類似設(shè)置的流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。

熒光顯微鏡

每個(gè)50µL小瓶足以容納100個(gè)微量滴定板孔。

在微型離心機(jī)中短暫旋轉(zhuǎn)解凍的小瓶，以去除可能被困在瓶蓋中的任何試劑。

在PBS中稀釋1:100的綠色活/死染色濃縮儲(chǔ)備溶液（500µM），以制備5000 nM的工作溶液。例如，向990µL PBS中加入10µL儲(chǔ)備濃縮液。只準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)所需的東西。應(yīng)立即使用工作溶液，并丟棄任何剩余的稀釋溶液。

用1:10稀釋的5000 nM工作溶液加標(biāo)樣品。例如，用50µL工作溶液加標(biāo)0.45 mL樣品。

在室溫下避光培養(yǎng)樣品約10分鐘。

當(dāng)與DNA結(jié)合時(shí)，綠色活/死染色的峰值吸收為495nm，大發(fā)射為512nm。使用接近這些設(shè)置的光學(xué)過(guò)濾器，用熒光顯微鏡進(jìn)行可視化。

ImmunoChemistry Technologies簡(jiǎn)稱"ICT",提供各種細(xì)胞蛋白酶、細(xì)胞凋亡與細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒等研究工具，同時(shí)包含高質(zhì)量高靈敏度的 ELISA開(kāi)發(fā)試劑。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來(lái)源：https://www.amyjet.com/brand/Immunochemistry.shtml