膜聯(lián)蛋白V是具有血管抗凝血活性的鈣和磷脂結合蛋白家族的成員。體外實驗結果表明，它可能通過與凝血酶原競爭磷脂酰絲氨酸（PS）結合位點而在抑制凝血中發(fā)揮作用。在健康細胞中，PS通常保存在細胞膜的內小葉（胞質側）。當細胞發(fā)生凋亡時，早的可檢測指標是膜不對稱性的喪失。PS不再局限于膜的胞質部分，而是轉移到外小葉，并暴露在細胞表面。通過我們的Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒，免疫化學技術提供了一種經驗證的方法，可以使用Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI）試劑快速、輕松地區(qū)分兩種死亡細胞和活細胞。細胞凋亡早期，細胞膜完整，PS表面暴露，Annexin V-FITC染色呈陽性。PI包含在凋亡檢測試劑盒中，用于識別晚期凋亡和壞死細胞，這些細胞已失去質膜完整性。這些細胞將被膜聯(lián)蛋白V-FITC和碘化丙啶雙重標記（綠色和紅色熒光）。假設沒有治療或細胞周期相關事件暫時暴露正常內化的帶負電荷的PS實體，則具有完整質膜的活細胞將排除PI并保持不被膜聯(lián)蛋白V-FITC探針染色。該試劑盒還包括一種特殊配制的鈣基結合緩沖液，這是發(fā)生膜聯(lián)蛋白V結合所必需的。

艾美捷Immunochemistry Annexin V-FITC凋亡檢測試劑盒化學性質：

靶細胞凋亡，暴露的磷脂酰絲氨酸

激發(fā)/發(fā)射488nm/530 nm

分析方法流式細胞術

樣品類型細胞培養(yǎng)

儲存2-8°C

協(xié)議：

準備樣品和對照品

用diH2O稀釋10X結合緩沖液1:10。

在冰冷的培養(yǎng)基或PBS中洗滌細胞，并重新懸浮在冰冷的1X結合緩沖液中。

在PBS中稀釋膜聯(lián)蛋白V-FITC 1:10。

在PBS中稀釋碘化丙啶（PI）1:2。

將稀釋的Annexin V-FITC以1:20的比例添加到每個樣品中（每100µL培養(yǎng)細胞等分試樣5µL）。

將稀釋的PI以1:20的比例添加到每個樣品中（每100µL培養(yǎng)細胞等分試樣5µL）。

培養(yǎng)約10分鐘，避光。

通過向每個樣品中添加250µL 1X結合緩沖液來稀釋樣品。

用流式細胞儀分析。膜聯(lián)蛋白V-FITC在494nm處佳激發(fā)，在519nm處發(fā)射（通常在FL1中讀�。�。PI在536nm處佳激發(fā)并且在617nm處具有峰值發(fā)射（通常在FL3中讀取）。

艾美捷Immunochemistry Annexin V-FITC凋亡檢測試劑盒組分：

Annexin V-FITC, 200X, 50 µL, 1 vial, #6340

10X Binding Buffer, 1.7 mL, 3 vials, #6341

Propidium Iodide, 250 µg/mL, 1 mL, 1 vial, #638

Kit Manual

ImmunoChemistry Technologies簡稱"ICT",提供各種細胞蛋白酶、細胞凋亡與細胞毒性檢測試劑盒等研究工具，同時包含高質量高靈敏度的 ELISA開發(fā)試劑。艾美捷科技是ImmunoChemistry的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質的產品與服務。

來源：https://www.amyjet.com/brand/Immunochemistry.shtml