用銀色增強(qiáng)劑進(jìn)行凝膠染色：LI Silver

具體：僅開發(fā)Nanogold®標(biāo)記帶

快速：1-5分鐘

敏感：比普通凝膠染色更敏感

可直接用于凝膠或印跡轉(zhuǎn)移

Nanoprobes艾美捷1.4納米的Nanogold®顆�？梢杂勉y進(jìn)行顯影，使其成為肉眼可見，從而將信號(hào)放大數(shù)千倍。如果你使用了單馬來酰亞胺納米金、單NHS納米金®或單氨基納米金®來標(biāo)記蛋白質(zhì)或其他分子，那么這些可以很容易地在凝膠上使用銀增強(qiáng)技術(shù)進(jìn)行分析和檢測(cè)。以下是在凝膠或印跡上檢測(cè)Nanogold®標(biāo)記的條帶的方案。

用Nanoprobes 艾美捷Nanogold®標(biāo)記后，通過柱色譜法、蔗糖梯度法或其他純化方法去除未結(jié)合的金顆粒。在樣品中留下多余的游離Nanogold®會(huì)干擾預(yù)期的凝膠染色。

像往常一樣運(yùn)行凝膠，但有兩個(gè)預(yù)防措施。

A) Nanogold®會(huì)被β-巰基乙醇（或DTT）降解，所以樣品不能與還原劑混合，即必須運(yùn)行非還原性凝膠。其他成分（SDS等）的正常濃度是可以接受的。

B) 樣品不能被加熱。通常樣品在加載到凝膠會(huì)在SDS中煮沸。由于Nanogold®在50℃以上會(huì)被降解，所以建議不要加熱。這通常不是一個(gè)限制，因?yàn)榇蠖鄶?shù)樣品無需加熱即可獲得正常的凝膠圖案。

如果需要，可以將凝膠電轉(zhuǎn)到硝酸纖維素上，盡管這不是必須的。

用多次更換的去離子水沖洗凝膠。由于銀顯影劑是由鹵化物沉淀的，所以必須去除微量的氯化鈉。

將凝膠或印跡放在一個(gè)合適的盤子里，涂上足夠的新鮮制備的LI銀（目錄號(hào)2013）以覆蓋凝膠。LI銀是通過混合等量的A和B成分制備的。不要使用通常的凝膠銀染色劑，它們與LI銀完全不同，不能有效地顯影Nanogold®。

注意帶狀物的發(fā)展，它應(yīng)該呈現(xiàn)棕黑色。沒有進(jìn)入凝膠的金的聚集物或少量的游離金可能會(huì)產(chǎn)生背景染色。通常的顯影時(shí)間為1-5分鐘。過長(zhǎng)的顯影時(shí)間（大于30分鐘）會(huì)導(dǎo)致一些非特異性的背景自核染色。

當(dāng)達(dá)到佳染色效果時(shí)，用去離子水沖洗，停止顯影。終染色的凝膠現(xiàn)在是一個(gè)永久的記錄。

為了對(duì)所有條帶進(jìn)行比較和觀察，可以運(yùn)行一個(gè)重復(fù)的凝膠，用庫(kù)馬西藍(lán)或凝膠銀染色劑進(jìn)行染色。

由于Nanogold®顆粒的重量增加（約15,000），Nanogold®標(biāo)記的分子在凝膠上通常會(huì)高出約15,000 MW。因此，標(biāo)記的和未標(biāo)記的分子被分開，它們的比例可以通過通常的凝膠染色（Coomassie或凝膠銀染色）來估計(jì)，凝膠染色顯示總的蛋白質(zhì)含量。

相關(guān)文獻(xiàn)：

Gregori, L., J. F. Hainfeld, M. N. Simon, ａnd D. Goldgaber. 1997. Binding of amyloid beta protein to the 20S proteasome. J Biol Chem 272 (1): 58–62

Wilkens, S. ａnd Capaldi, R.A. Monomaleimidogold labeling of the gamma subunit of the Escherichia coli F1 ATPase examined by cryoelectron microscopy. Arch Biochem. Biophys., 229, 105-109 (1992).

Nanoprobes特色熒光納米金探針在一個(gè)探針中結(jié)合了納米金（Nanogold）和熒光素，用于熒光和電鏡兩種技術(shù)共同進(jìn)行樣品成像。艾美捷科技是Nanoprobes的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/merchants/Nanoprobes-n.html