Jackson丨艾美捷直接-一步法：

在直接檢測方法中（圖1（A）），直接結(jié)合報(bào)告酶或熒光染料的一抗體用于在單個(gè)培養(yǎng)步驟后檢測印跡膜上的蛋白質(zhì)抗原。雖然這種一步法更快，但并沒有廣泛使用。圖1（B）說明了直接結(jié)合一抗體的問題，報(bào)告分子可以阻斷一抗體中的抗原結(jié)合區(qū)域，從而阻止對抗原的良好識別，并導(dǎo)致靈敏度降低。過量的一次可補(bǔ)償這種影響，但可能導(dǎo)致再現(xiàn)性差和背景增加。

Jackson丨艾美捷間接-兩步法：

Western印跡的兩步間接檢測方法避免了對抗原檢測的干擾。未標(biāo)記的一抗體與抗原結(jié)合在印跡膜上形成復(fù)合物。清洗后，用與報(bào)告酶或熒光團(tuán)結(jié)合的二抗體培養(yǎng)印跡。多個(gè)二抗體與一抗體上的表位結(jié)合，形成標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物（圖1（C））。雖然間接法需要更多的洗滌和培養(yǎng)步驟，但與直接法相比，它具有許多優(yōu)點(diǎn)，包括信號放大和靈活性。

圖1：（A） 直接結(jié)合的一抗體結(jié)合結(jié)合在膜上的抗原。（B） 由于報(bào)告酶或熒光團(tuán)可以結(jié)合到抗原結(jié)合區(qū)并降低抗體對其靶點(diǎn)的親和力，所以直接結(jié)合的一抗體和結(jié)合在膜上的抗原結(jié)合較差。使用輔助設(shè)備可以消除這種情況。（C） 間接方法-多重共軛二抗體與未標(biāo)記物一抗體結(jié)合。

直接和間接檢測方法適用于Western blotting，但也可能與其他技術(shù)相關(guān)，如IHC/ICC、ELISA和流式細(xì)胞術(shù)。

Jackson直接和間接免疫印跡法文獻(xiàn)參考：

Alberts B et al (1994) Molecular biology of the Cell. 3rd Ed. Garland press. London

Roitt et al (2005) Immunology. 6th Ed. Mosby. Spain

Jackson ImmunoResearch注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)于大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動(dòng)物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml