有三種不同的電印跡方法：濕法、半干法和干法。在所有方法中，凝膠和膜直接接觸，確保它們之間的所有空氣都被排出。（表1）

Jackson公司：確認(rèn)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移

蛋白質(zhì)標(biāo)記轉(zhuǎn)移的目視檢查可以粗略評(píng)估蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移的效率。然而，臨時(shí)膜染色是確定蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移的更準(zhǔn)確的方法。Ponceau S（0.1% w/v Ponceau S，5% v/v 乙酸水溶液）是種快速簡便的染色劑，與硝酸纖維素膜和 PVDF 膜兼容。

染色后，蛋白質(zhì)顯示為紅色條帶。條帶的強(qiáng)度表示與膜結(jié)合的蛋白質(zhì)的量，并表示印跡均勻性。

可能會(huì)干擾蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移的氣泡顯示為空白圓圈。

Ponceau S 可以通過用去離子水洗滌去除，并且不影響蛋白質(zhì)印跡的后續(xù)步驟。Ponceau S 的靈敏度低，檢測限相對(duì)較低 (250 ng)。其他蛋白質(zhì)染色劑包括膠體金、印度墨水和考馬斯亮藍(lán)。然而，這些不能輕易地用水逆轉(zhuǎn)并阻礙隨后的免疫探測。

考馬斯亮藍(lán)可用于染色聚丙烯酰胺凝膠以識(shí)別任何未能轉(zhuǎn)移的蛋白質(zhì)。確定蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移是否完成對(duì)于下游分析很重要。因此，必須通過調(diào)整緩沖液成分和優(yōu)化轉(zhuǎn)移時(shí)間來優(yōu)化印跡過程。

Jackson公司：替代蛋白質(zhì)印跡平臺(tái)

已經(jīng)開發(fā)出新技術(shù)來提高生產(chǎn)力和靈活性。新平臺(tái)通過結(jié)合毛細(xì)管電泳、微流體和芯片實(shí)驗(yàn)室微分析系統(tǒng)等技術(shù)來縮短分析時(shí)間、提供多路檢測并實(shí)現(xiàn)高通量。這些小容量設(shè)備可以處理更少量的蛋白質(zhì)，需要更少量的抗體和其他試劑，并降低每次檢測的成本。更快的處理使高通量和多路復(fù)用分析成為可能。

與傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)印跡程序相比，些新系統(tǒng)在某些情況下甚至表現(xiàn)出更高的靈敏度。已經(jīng)開發(fā)出新技術(shù)來促進(jìn)自動(dòng)化，減少在傳統(tǒng)蛋白質(zhì)印跡中觀察到的用戶錯(cuò)誤的可能性，從而提供標(biāo)準(zhǔn)化的結(jié)果。然而，在這些設(shè)備普及之仍有待改進(jìn)。

毛細(xì)管電泳

毛細(xì)管電泳分離蛋白質(zhì)，因?yàn)樗鼈兺ㄟ^填充有聚合物基質(zhì)的小毛細(xì)管遷移，該聚合物基質(zhì)以類似于聚丙烯酰胺凝膠的方式阻礙它們的遷移。

蛋白質(zhì)從毛細(xì)管洗脫到緩慢移動(dòng)的膜上，從而解決蛋白質(zhì)大小問題。然后使用傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)印跡法探測蛋白質(zhì)。

微芯片毛細(xì)管電泳

微芯片毛細(xì)管電泳 (MCE) 也使用毛細(xì)管作用來按大小解析蛋白質(zhì)。使用微芯片代替毛細(xì)管。然后將分離的蛋白質(zhì)捕獲在膜上并通過免疫測定進(jìn)行探測。

2016 年，金等人。與傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)印跡相比，使用 MCE 設(shè)備證明了更高的靈敏度和更好的分辨率。

Herr 小組進(jìn)步開發(fā)了種使整個(gè)蛋白質(zhì)印跡過程小型化的設(shè)備。光敏凝膠通過光誘導(dǎo)蛋白質(zhì)與凝膠的交聯(lián)來捕獲分離的蛋白質(zhì)，然后進(jìn)行原位免疫探測。

單細(xì)胞免疫印跡

使用多層微流體裝置實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞蛋白質(zhì)印跡，允許分析細(xì)胞間的變化。將單個(gè)細(xì)胞置于微孔中，并通過“蓋層”添加裂解試劑。

然后聚丙烯酰胺凝膠基層使用雙向電泳分離蛋白質(zhì)。該技術(shù)已被證明可實(shí)現(xiàn)亞細(xì)胞分辨率，并在 6 小時(shí)內(nèi)處理 103 個(gè)細(xì)胞。

文獻(xiàn)參考：

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GE醫(yī)療。（2011）。蛋白質(zhì)印跡原理和方法。

巴斯 JJ等人。（2017）。Western Blotting 應(yīng)用于生理研究的技術(shù)考慮概述。斯堪的納維亞運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)與科學(xué)雜志。doi: 10.1111/sms.12702。

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米什拉 A.等人。（2017）。蛋白質(zhì)純化和分析：下代蛋白質(zhì)印跡技術(shù)。期待評(píng)論蛋白質(zhì)組學(xué)。doi:10.1080/14789450.2017.1388167。

Jackson公司注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)域覆蓋各大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動(dòng)物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml

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