比色檢測(cè)是種經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便的Western印跡檢測(cè)分析物的方法。與二抗偶聯(lián)的酶報(bào)告基因與顯色底物發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生視覺(jué)上可檢測(cè)的信號(hào)，從而直接在印跡膜上識(shí)別目的蛋白的存在。

這期的主題是Jackson ImmunoResearch公司為大家講解：Western Blot、IHC 和 ELISA 的顯色檢測(cè)。

具有比色檢測(cè)的蛋白質(zhì)印跡使用與酶報(bào)告分子偶聯(lián)的二抗，該酶報(bào)告分子催化可溶性顯色底物轉(zhuǎn)化為有色不溶性產(chǎn)物。該產(chǎn)物沉淀在印跡膜上，產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的彩色條帶，從而識(shí)別出感興趣的蛋白質(zhì)。

Jackson公司比色信號(hào)檢測(cè)是種用于般實(shí)驗(yàn)室的有用方法，設(shè)置成本低，因?yàn)椴恍枰厥庠O(shè)備來(lái)可視化信號(hào)。

圖 1：間接比色檢測(cè)。A. 酶聯(lián)二抗與目的蛋白的抗結(jié)合。B. 將底物添加到抗體-抗原復(fù)合物中。C. 酶與底物反應(yīng)，形成可檢測(cè)的有色產(chǎn)物。

、Jackson公司：開(kāi)發(fā)印跡很簡(jiǎn)單

將膜與顯色底物起溫育，直到產(chǎn)生所需水平的信號(hào)，然后簡(jiǎn)單地將底物洗掉。這會(huì)停止酶促反應(yīng)并阻止印跡進(jìn)步發(fā)展。比色檢測(cè)操作簡(jiǎn)單快捷，與化學(xué)發(fā)光或熒光系統(tǒng)相比，為優(yōu)化提供了更大的靈活性。然而，固定的沉淀物不利于膜的剝離和重新探測(cè)，使得使用額外抗體的多次探測(cè)不可靠。

比色 Western blotting 可以具有高靈敏度，但長(zhǎng)時(shí)間孵育會(huì)導(dǎo)致背景信號(hào)增加，這可能會(huì)掩蓋來(lái)自感興趣蛋白質(zhì)的信號(hào)。因此，比色檢測(cè)可能不適用于低豐度蛋白質(zhì)。然而，當(dāng)已知蛋白質(zhì)豐富或方法已優(yōu)化時(shí)，簡(jiǎn)單性和低成本使得比色檢測(cè)具有吸引力。有多種底物可用，它們會(huì)產(chǎn)生系列有色沉淀物，每種都提供不同的靈敏度。

圖 2：比色西方印跡。通過(guò) SDS-PAGE 分離還原的和 SDS 變性的小鼠 IgG 的重鏈 (HC 50 kDa) 和輕鏈 (LC 25 kDa)，并使用過(guò)氧化物酶-山羊抗小鼠 IgG (H+L) 在蛋白質(zhì)印跡上檢測(cè)并用 TMB 可視化顯色底物。

Jackson公司注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)域覆蓋各大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動(dòng)物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson公司的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。