洗滌去除印跡上存在的未結(jié)合或聚集的蛋白質(zhì)以及可能干擾靶分子檢測并有助于降低背景信號的未結(jié)合試劑。可以通過提高信噪比來提高檢測靈敏度，從而更準(zhǔn)確地分析目標(biāo)蛋白質(zhì)。我們的蛋白質(zhì)印跡指南的第 7 部分詳細(xì)介紹了蛋白質(zhì)印跡的洗滌步驟的實踐。

Jackson公司蛋白質(zhì)印跡指南丨膜清洗概述：

·洗滌步驟程序

·選擇合適的洗滌緩沖液

·參考

、洗滌步驟程序 

1.洗滌通常在室溫下進(jìn)行。

2.通過將膜置于完全浸沒膜的定體積的洗滌緩沖液中來洗滌印跡。例如，平均 10 cm² 的印跡需要 >40 ml 的洗滌緩沖液，我們通常使用 100 ml。

3.將膜在洗滌緩沖液中孵育 5-10 分鐘，并使用搖桿或平臺搖床或合適的印跡處理器不斷攪拌。

4.然后在每次試劑孵育之間重復(fù)洗滌過程。

二、選擇合適的洗滌緩沖液

1.磷酸鹽緩沖液 (PBS)

PBS 溶液的配方可能有所不同，但通過結(jié)合磷酸鈉和氯化鈉將溶液緩沖至 7.5 的 pH 值，可以接近生理條件。如果目標(biāo)蛋白被磷酸化，或者要使用堿性磷酸酶 (AP) 偶聯(lián)物，則應(yīng)避免使用 PBS，因為磷酸鹽會與磷酸化蛋白相互作用或淬滅 AP 活性，從而影響結(jié)果的可靠性。

2.Tris 緩沖鹽水 (TBS)

TBS 有時用作洗滌緩沖液以替代 PBS。它通常通過將 Tris Base 與 Tris HCL 和氯化鈉混合制成生理 pH 值約為 7.2 的溶液。

3.洗滌劑

加入去污劑如 Triton X-100、SDS 或 Tween-20™ 以防止未結(jié)合的蛋白質(zhì)聚集。粘性復(fù)合物可以形成并與膜結(jié)合，造成背景 Tween-20™ 通常以溶液的 0.05% 至 0.1% v/v 使用。

高于 0.1% 的濃度會從膜上剝離靶蛋白以及與其結(jié)合的抗體，從而降低印跡的信號和準(zhǔn)確性。

注意1：微生物生長會產(chǎn)生背景信號

洗滌緩沖液應(yīng)在使用新鮮配制。

注意2：洗滌緩沖液中的封閉試劑

有時將封閉試劑添加到洗滌緩沖液中。我們建議僅使用緩沖溶液，不添加封閉蛋白，如奶粉或 BSA。

三、Jackson ImmunoResearch 蛋白質(zhì)印跡指南丨膜清洗部分文獻(xiàn)參考：

Blancher C. et al. (2001). SDS-PAGE ａnd Western Blotting Techniques. Methods in Molecular Medicine. DOI: 10.1385/1-59259-136-1:145.

Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc. (2017). Western Blotting Troubleshooting Guide! https://www.jacksonimmuno.com/secondary-antibody-resource/technical-tips/western-blot-trouble-shooting/

GE Healthcare. (2011). Western Blotting Principles ａnd Methods.

Jackson公司注于親和純化的二抗和純化免疫球蛋白研究，服務(wù)域覆蓋各大學(xué)科研所和醫(yī)院里的動物研究以及生物醫(yī)學(xué)研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家。艾美捷科技是Jackson公司的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

來源：https://www.amyjet.com/brand/jackson-china-distributor.shtml